6.1: Las células requieren aminoácidos que contienen azufre

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Los organismos mutantes proporcionan herramientas poderosas para estudiar las vías bioquímicas en las células vivas. Este semestre, estamos trabajando con cepas de levadura que son incapaces de sintetizar metionina (Met) o cisteína (Cys) debido a que uno de los genes involucrados en la vía biosintética ha sido inactivado. Met y Cys son aminoácidos esenciales para todos los organismos. Los átomos de azufre en sus cadenas laterales imparten químicas distintivas a Met y Cys, lo que tiene importantes implicaciones para la función de las proteínas. A diferencia de nosotros, las levaduras de tipo silvestre son capaces de sintetizar tanto Met como Cys, utilizando únicamente sulfato inorgánico como fuente de azufre. A cada una de las cepas mutantes met que estamos usando este semestre le falta un solo gen MET, y esta deleción evita que la cepa crezca en medios que contienen solo sulfato como fuente de azufre. Los genes MET eliminados en las cepas han sido reemplazados por un gen de resistencia a kanamicina bacteriana (KAN ^R) por recombinación homóloga (Winzeler et al. , 1999). Dependiendo de la mutación met exacta, las cepas pueden ser capaces de sintetizar Met y Cys a partir de otras fuentes de azufre que transportan a la célula y convierten en Met o Cys. En este laboratorio, utilizará medios selectivos que contienen diversas fuentes de azufre y medios diferenciales para distinguir entre tres mutantes met. En el siguiente laboratorio, utilizará la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para identificar de manera más concluyente las cepas met mutantes.