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8.2: Preparar el gel de agarosa

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    En este laboratorio, utilizará geles de agarosa para separar las moléculas de ADN producidas en las reacciones de PCR. Estos productos de PCR deben resolverse bien en geles de agarosa al 1.25% preparados en tampón TAE, que proporcionan una buena separación de moléculas que son menores a 2 kb. Coloque la bandeja de colada en el aparato de gel. Si está utilizando los aparatos BioRad, coloque las cuñas negras en cada extremo de la bandeja de fundición.

    1. Determine la cantidad de agarosa que necesitará para un gel de 1.25% (1.25 g/100 mL) que se ajuste a su plataforma de fundición. La mayoría de los aparatos de gel en el laboratorio son los sistemas BioRad Mini-Sub GT con una bandeja de fundición de 7 cm x 7 cm que acomoda un gel de 30 mL. Consulta tus cálculos con tus compañeros antes de continuar. Screen Shot 2019-01-03 a las 11.13.44 PM.png

    2. Llene un cilindro graduado con el volumen apropiado de tampón TAE. Vierte la solución en un matraz pequeño.

    3. Pesar la cantidad apropiada de agarosa. Espolvoree la agarosa sobre la superficie del TAE en el matraz. Nota: la agarosa no se disolverá hasta que se caliente.

    4. Disolver la agarosa calentando la solución por intervalos de 15-20 segundos en un horno microondas. Después de cada intervalo, retire el matraz y gírelo suavemente un poco para dispersar el contenido. Obsérvese si las partículas de agarosa son aún aparentes o si la agarosa se ha disuelto. Los mejores geles están hechos de agarosa que NO ha sido sobrecocida.

    NOTA DE SEGURIDAD: ¡La solución de agarosa estará muy CALIENTE cuando la retires de la microonda! Tenga precaución al manipular el matraz. Tenga especial cuidado de no entrar en contacto con el vapor que vendrá a través de la abertura del matraz. Dobla varias toallas de papel y envuélvalas alrededor del cuello de la petaca cuando la manejas. Si le sucede que derrama algo de agarosa caliente sobre su piel, lávala inmediatamente con agua fría y avise a su TA.

    5. Permita que la solución de agarosa se enfríe hasta que pueda tocar cómodamente el matraz con las manos. ¡Las soluciones de agarosa superiores a 60° C deformarán la bandeja de fundición! Vierte el gel. Coloque el peine de muestra en su lugar. No mueva la plataforma de colada hasta que el gel se asiente. Sabrás que el gel se fija cuando se vuelve opaco. Deje que el gel se cure durante unos 20 minutos después de que se haya fraguado.


    This page titled 8.2: Preparar el gel de agarosa is shared under a CC BY-NC-SA license and was authored, remixed, and/or curated by Clare M. O’Connor.