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10: Plásmidos

  • Page ID
    53661
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    Los plásmidos son pequeños trozos circulares de ADN que se replican independientemente del cromosoma huésped. Los plásmidos han
    revolucionado la biología molecular al permitir a los investigadores obtener muchas copias de moléculas de ADN personalizadas.
    En este laboratorio, aislarás plásmidos de cepas no patógenas de Escherichia coli, que utilizarás
    en experimentos posteriores para transformar cepas met de Saccharomyces cerevisiae.


    Objetivos

    Al término de este laboratorio, los alumnos deberán ser capaces de:

    • describir la estructura de los plásmidos y su mecanismo de replicación.
    • identificar elementos funcionales que han sido diseñados en plásmidos de laboratorio.
    • explicar cómo se utilizan las propiedades físicas de los plásmidos en su purificación.
    • aislar plásmidos de cepas transformadas de Escherichia coli.

    Los plásmidos son los caballos de batalla de la biología molecular. Los plásmidos son pequeñas moléculas de ADN circulares que se replican independientemente de los cromosomas en los microorganismos que los albergan. Los plásmidos a menudo se denominan vectores, ya que pueden usarse para transferir ADN extraño a una célula. Los plásmidos utilizados en biología molecular han sido construidos por investigadores, quienes utilizaron la tecnología de ADN recombinante para incorporar muchos elementos funcionales diferentes en plásmidos naturales. Los plásmidos han sido diseñados para transportar hasta 10 kb de ADN extraño y se aíslan fácilmente de microorganismos para su manipulación en el laboratorio. Para los próximos laboratorios, su equipo trabajará con plásmidos de sobreexpresión de levadura. Su equipo trabajará con tres plásmidos: un plásmido que porta un gen MET de S. cerevisiae, un plásmido que porta su homólogo de S. pombe y un plásmido que porta el gen lacZ bacteriano, que actuará como control negativo. En este laboratorio, aislarás plásmidos de cultivos bacterianos. En las próximas semanas, caracterizará los plásmidos y luego los usará para transformar cepas de levaduras mutantes, probando si la función del gen MET se ha conservado entre S. cerevisiae y S. pombe.


    This page titled 10: Plásmidos is shared under a CC BY-NC-SA license and was authored, remixed, and/or curated by Clare M. O’Connor.