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11: Mapeo de restricción

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    Las endonucleasas de restricción (RE) reconocen y escinden sitios específicos en moléculas de ADN. En la naturaleza, los RE son parte de los sistemas de defensa bacteriana. En el laboratorio de biología molecular, son una herramienta indispensable tanto para analizar como para construir moléculas de ADN. En este laboratorio, utilizará RE para distinguir qué plásmidos contienen ORF de S. cerevisiae o S. pombe o el gen lacZ bacteriano.


    Objetivos

    Al finalizar este laboratorio, los alumnos podrán:

    • describir los orígenes y funciones biológicos de los RE.
    • utilizar herramientas en línea para identificar sitios de reconocimiento para RE en una molécula de ADN.
    • idear una estrategia para distinguir las moléculas de ADN mediante la selección de RE para su uso en digestiones de ADN.
    • interpretar los patrones de fragmentos de restricción separados en geles de agarosa.

    En el último experimento, su grupo aisló tres plásmidos diferentes de bacterias transformadas. Uno de los tres plásmidos, porta el gen MET de S. cerevisiae que ha sido inactivado en su cepa de levadura. Este gen MET se clonó en el plásmido pBG1805 (Gelperin et al. , 2005). Un segundo plásmido porta el homólogo de S. pombe para el gen MET, clonado en el plásmido pYES2.1. El tercer plásmido es un control negativo que contiene el gen lacZ+ bacteriano clonado en pYES2.1. En este laboratorio, su equipo diseñará y llevará a cabo una estrategia para distinguir entre los plásmidos utilizando endonucleasas de restricción. En el siguiente laboratorio, separará los productos de los digestos de restricción, o fragmentos de restricción, mediante electroforesis en gel de agarosa, generando un mapa de restricción.


    This page titled 11: Mapeo de restricción is shared under a CC BY-NC-SA license and was authored, remixed, and/or curated by Clare M. O’Connor.