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12.2: La complementación se usa a menudo para aislar transformantes

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    El ADN utilizado para la transformación debe portar un marcador seleccionable cuya presencia pueda detectarse mediante cribado. Después de una transformación, las células se cultivan en placas en medios selectivos que permitirán que las células transformadas, pero no no transformadas, crezcan. Todos los plásmidos derivados de pYES2.1 que estamos utilizando llevan una copia normal del gen URA3 de levadura, así como el promotor URA3, por lo que el gen está regulado de manera muy similar a un gen cromosómico normal. Nuestras cepas de deleción de levadura se derivaron de la cepa BY4742, que tiene el alelo ura3∆0 (Winzeler et al., 1999) La complementación ocurrirá porque el plásmido porta una copia funcional del gen que es defectuoso en la cepa hospedadora mutante. La proteína Ura3p producida a partir del gen URA3 codificado por plásmido compensa la deleción ura3 en el cromosoma de levadura, permitiendo que las células transformadas crezcan en ausencia de uracilo, como se muestra a continuación. Debido a su fiabilidad, muchos esquemas de transformación de levaduras se basan en la complementación URA3 para aislar transformantes.

    Transformación y complementación de plásmidos Se transforman células de levadura ura3
    competentes incubando células con un plásmido que contiene el gen URA3 de levadura a temperatura elevada.
    Las células transformadas se seleccionan en medios que no contienen uracilo.


    This page titled 12.2: La complementación se usa a menudo para aislar transformantes is shared under a CC BY-NC-SA license and was authored, remixed, and/or curated by Clare M. O’Connor.