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14.3: Ejecución de geles SDS-PAGE

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    Configurar el aparato de electroforesis

    1. Recupere uno de los geles SDS-PAGE del refrigerador.
    2. Retire con cuidado el peine del gel espaciador.
    3. Retire el marco de fundición del sándwich de casete de gel y coloque el sándwich contra la junta en un lado del conjunto del electrodo, con la placa corta hacia adentro. Coloque un segundo casete de gel o una presa amortiguadora contra la junta en el otro lado del conjunto del electrodo.
    4. Sujete las abrazaderas verdes en los lados del conjunto del electrodo (abajo).
    5. Baje la cámara en el tanque de electroforesis.
    6. Llene el espacio entre los dos geles con tampón de ejecución Tris-glicina. Esto forma la cámara superior para electroforesis.
    7. Agregue tampón de funcionamiento Tris-glicina a la cámara externa (inferior) hasta que el nivel sea lo suficientemente alto como para cubrir el cable de platino en el conjunto del electrodo.

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    Cargar y ejecutar muestras en el gel SDS-PAGE

    1. Recupere sus extractos celulares del congelador. Recordemos que las muestras ya han sido mezcladas con un colorante de rastreo y glicerol. Permita que los extractos se descongelen y se vórtice vigorosamente durante ~ 10 segundos para mezclar bien el contenido.
    2. Usando puntas de micropipeta de carga de gel (las puntas tienen puntas muy largas y delgadas y se ajustan a P20s o P200s), cargue hasta 15 μL de muestra en cada pozo. Cargar 5 μL de un patrón de peso molecular en un carril del gel. Cargue las muestras lentamente y permita que las muestras se asienten uniformemente en el fondo del pozo.

      NOTA: Asegúrese de registrar el orden de las muestras cargadas en el gel.

    3. Conecte el tanque a la fuente de alimentación. Coloque la cubierta del tanque en los electrodos que sobresalen del conjunto de electrodos. Inserte los cables eléctricos en las tomas de la fuente de alimentación (conecte de negro a negro y rojo a rojo).
    4. Encienda la fuente de alimentación. Ejecute el gel a un voltaje constante de 120‐150 V. Ejecute el gel hasta que el frente del tinte azul casi llegue al fondo del gel. Esto puede tardar entre 45-60 min.

    This page titled 14.3: Ejecución de geles SDS-PAGE is shared under a CC BY-NC-SA license and was authored, remixed, and/or curated by Clare M. O’Connor.