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16.5: Micro-informe 4- Análisis de complementación

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    53478
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    Figura: La figura en el corazón de este microreporte es una figura de panel múltiple que muestra placas de réplica de cepas que han sido transformadas con plásmidos de sobreexpresión. Consulte los lineamientos del Micro-reporte 1 para ver cómo configurar figuras con múltiples paneles.

    Materiales y Métodos: Proporcionar información sobre los procedimientos de transformación y reproducción de placas, así como los medios utilizados en los experimentos. Cuando sea posible, haga referencia al manual del laboratorio, anotando cualquier cambio que haya realizado en los procedimientos.

    Cepas y plásmidos: Ver micro-informes 1 y 3.

    Medios de comunicación: Ver microinforme 1.

    Transformación: Alguien que intente reproducir sus resultados necesitará conocer detalles sobre el procedimiento de transformación, ya que las eficiencias de transformación varían ampliamente y muestran una fuerte dependencia de los reactivos y las condiciones de incubación. Puede hacer referencia al manual del laboratorio.

    Chapado de réplica: Este es un procedimiento estándar. También puede hacer referencia al manual del laboratorio.

    Resultados y Discusión: Su figura con las placas escaneadas es el punto focal de esta sección. Incluir una sola tabla de datos que con la eficiencia de transformación calculada con cada plásmido y la capacidad de las cepas transformadas (Y/N o +/-) para crecer en las diversas placas de réplica. Las eficiencias de transformación deben expresarse en número de células transformadas/μg de ADN plasmídico.

    La sección de I+D debería contar una historia de cómo las placas de réplica le permitieron decidir si su proteína
    Met se conserva entre las dos especies de levadura. Puede o no haber observado complementación. El incumplimiento de la complementación no se debe necesariamente a un error experimental. (¿Qué placas sirven como control contra el error experimental?) La complementación es un ensayo funcional que depende tanto de la expresión de la proteína de fusión como de la capacidad de la proteína de fusión para catalizar una reacción en la biosíntesis de Met. Las proteínas de fusión tienen grandes extensiones C-terminales que podrían afectar sus funciones enzimáticas normales. Los resultados negativos pueden ser tan importantes como los resultados positivos en el avance de la comprensión científica.

    Si no observó complementación, discuta las posibles razones por las que esto pudo haber sucedido y proponga experimentos futuros que puedan ayudar a responder a estas preguntas. Es posible que desee sugerir nuevas construcciones plasmídicas para experimentos adicionales. También es posible que desee traer información de sus análisis BLASTP. (¿Qué es el valor E?) Asegúrese de incluir suficiente justificación para que sus experimentos propuestos brinden datos útiles.


    This page titled 16.5: Micro-informe 4- Análisis de complementación is shared under a CC BY-NC-SA license and was authored, remixed, and/or curated by Clare M. O’Connor.