8.1: Lisis celular
- Page ID
- 53316
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)\(\newcommand{\AA}{\unicode[.8,0]{x212B}}\)
Fuente: BiochemFFA_8_1.pdf. Todo el libro de texto está disponible de forma gratuita de los autores en http://biochem.science.oregonstate.edu/content/biochemistry-free-and-easy
Para separar los compuestos de los ambientes celulares, primero hay que romper (lisar) las células. Las células se abren por rotura, en soluciones tamponadas, para obtener un lisado. Hay varias formas de lograrlo.
- Choque osmótico y enzimas: Una forma de lisar las células es disminuyendo la fuerza iónica del medio en el que se encuentran las células. Esto puede hacer que las células se hinchen y exploten. Se pueden usar tensioactivos suaves para romper las membranas. La mayoría de las bacterias, levaduras y tejidos vegetales son resistentes a los choques osmóticos, debido a la presencia de paredes celulares, y generalmente se requieren técnicas de disrupción más fuertes. Las enzimas pueden ser útiles para ayudar a degradar las paredes celulares. La lisozima, por ejemplo, es muy útil para descomponer paredes bacterianas. Otras enzimas comúnmente empleadas incluyen celulasa (plantas), proteasas, manasas y otras.
- Interrupción mecánica: La agitación mecánica se puede emplear en forma de perlas que se agitan con una mezcla de células. En este método, las células son bombardeadas con diminutas cuentas de vidrio que rompen las células para abrirlas. La sonicación (ondas sonoras de 20-50 kHz) proporciona un tipo alternativo de agitación que puede ser eficaz. Sin embargo, el método es ruidoso y genera calor que puede ser problemático para los compuestos termosensibles.
- Interrupción de la presión: Otro medio para interrumpir las células consiste en usar una “bomba celular”. En este método, las celdas se colocan bajo presión muy alta (hasta 25,000 psi) y luego la presión se libera rápidamente. El rápido cambio de presión provoca que los gases disueltos en las celdas se liberen como burbujas que, a su vez, rompen las celdas abiertas.
- Criopulverización: La criopulverización se emplea a menudo para muestras que tienen una matriz extracelular resistente, como tejido conectivo, semilla y cartílago. En esta técnica, los tejidos se congelan utilizando nitrógeno líquido y luego se realiza la pulverización por impacto (típicamente, molienda, usando un mortero y mano de mortero o un potente molinillo eléctrico). El polvo así obtenido se suspende luego en el tampón apropiado.
Cualquiera que sea el método que se emplee para crear un lisado, las fracciones brutas obtenidas de él deben procesarse posteriormente mediante fraccionamiento.