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9.1: Interrupción celular

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    Hay varias formas de romper celdas abiertas.

    • Los métodos de lisis incluyen disminuir la fuerza iónica del medio en el que se mantienen las células. Esto puede hacer que las células se hinchen y exploten. Se pueden usar tensioactivos suaves para mejorar la eficiencia de la lisis. Sin embargo, la mayoría de las bacterias, levaduras y tejidos vegetales, que tienen paredes celulares, son resistentes a tales choques osmóticos y a menudo se requieren técnicas de interrupción más fuertes.
    • Las enzimas pueden ser útiles para ayudar a degradar las paredes celulares. La lisozima, por ejemplo, es muy útil para descomponer paredes bacterianas. Otras enzimas comúnmente empleadas incluyen celulasa (plantas), glicanasas, proteasas, manasas y otras.
    • La agitación mecánica se puede emplear en forma de pequeñas perlas que se agitan con una suspensión de células. A medida que las cuentas bombardean las celdas a gran velocidad, las rompen para abrirlas. La sonicación (ondas sonoras de 20-50 kHz) proporciona un método alternativo para lisar células. Sin embargo, el método es ruidoso y genera calor que puede ser problemático para los compuestos termosensibles.
    • Otro medio para interrumpir las células consiste en usar una “bomba celular”. En este método, las celdas se colocan bajo presión muy alta (hasta 25,000 psi). Cuando se libera la presión, el cambio rápido de presión provoca que los gases disueltos en las celdas se liberen como burbujas que, a su vez, rompen las celdas.
    • La criopulverización se emplea a menudo para muestras que tienen una matriz extracelular resistente, como tejido conectivo o semillas. En esta técnica, los tejidos se congelan con cenizas usando nitrógeno líquido y luego se muelen hasta obtener un polvo fino antes de extraer el contenido celular con un tampón.

    Cualquiera que sea el método que se emplee, los lisados crudos obtenidos contienen todas las moléculas en la célula y, por lo tanto, deben procesarse adicionalmente para separar las moléculas en subconjuntos o fracciones más pequeños.

    Colaboradores


    This page titled 9.1: Interrupción celular is shared under a CC BY-NC-SA license and was authored, remixed, and/or curated by Kevin Ahern & Indira Rajagopal.