3.1: Observación de microorganismos con microscopía óptica

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Los microscopios de luz tienen una resolución máxima de ~0.2 μm, lo que es suficiente para resolver células de levadura individuales y proporcionar información aproximada sobre su organización intracelular. (La información más detallada sobre la estructura subcelular requiere un microscopio electrónico.) Los microscopios de luz compuesta utilizan un sistema de lentes para recoger y enfocar la luz que pasa a través de un espécimen y proyectar la imagen en la retina del espectador. Los especímenes utilizados para microscopía óptica generalmente se tiñen para aumentar su contraste previo a las observaciones. Hoy en día, se ha descrito un gran número de reactivos especializados y protocolos para teñir células, y los investigadores seleccionan las tinciones para adecuarse a los propósitos de sus experimentos individuales.

En este laboratorio, aprenderás a ajustar el microscopio óptico usando un portaobjetos que contiene un frotis de sangre humana manchada. Las células sanguíneas se tiñeron con hematoxilina y eosina (H&E). Con la tinción de H&E, es posible observar orgánulos grandes, como el núcleo celular, que tiñe un púrpura oscuro. También utilizarás una solución simple de yodo para teñir levaduras vivas y células bacterianas. El yodo tiñe las partículas de glucógeno, aumentando así el contraste de los cultivos.

Nuestros laboratorios están equipados con microscopios de luz Leica DM500 (ver la siguiente página). La luz de una fuente LED en la base del microscopio ingresa a un condensador que enfoca la
luz que llegará a la muestra en la platina del microscopio. Los usuarios pueden controlar la cantidad de luz que llega al espécimen abriendo o cerrando un diafragma iris en el condensador. El microscopio tiene cuatro lentes de objetivo intercambiables, con aumentos de 4X, 10X, 40X y 100X. Las lentes oculares en los oculares magnifican las muestras 10 veces más, produciendo aumentos finales de 40X, 100X, 400X y 1000X. Las lentes en la DM500 son parfocales, lo que significa que las muestras permanecen razonablemente bien enfocadas cuando se cambian las lentes. Cuando trabaje con el microscopio, comience siempre con el objetivo de menor potencia, que es más fácil de enfocar, y trabaje hasta alcanzar los objetivos de mayor potencia.