4.1: Técnica estéril

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¡La técnica estéril es ESENCIAL cuando se trabaja con microorganismos! Es importante proteger las cepas de la contaminación con otras cepas y de los muchos microbios indefinidos en el ambiente. Un gran número de microorganismos diversos están a nuestro alrededor: en el aire, en las superficies de laboratorio, en tu piel y en tu ropa. Fieles a su nombre, los microorganismos son demasiado pequeños para ser detectados por el ojo, pero crecen rápidamente en medios de cultivo de laboratorio. Las técnicas de transferencia correctas y el uso de reactivos estériles suelen ser suficientes para evitar la contaminación.

Algunas precauciones simples reducirán la posibilidad de contaminación:

Limpie una pequeña área de trabajo en el banco de laboratorio con etanol al 70%.
Enciende un quemador Bunsen en tu área de trabajo mientras trabajas con cepas. El quemador produce una corriente ascendente que evita que los microorganismos en el aire caigan a los cultivos.
Use reactivos estériles, puntas de micropipeta y tubos de ensayo. Las puntas y los tubos de microcentrífuga deben mantenerse en recipientes cubiertos cuando no estén en uso.
Minimizar la contaminación de la ropa y las superficies corporales. Tire hacia atrás y asegure el cabello largo. Evite tocar o respirar sobre superficies estériles que entren en contacto con microorganismos.
Evita hablar cuando estés transfiriendo cepas.
¡Trabaja rápido! Minimizar el tiempo que se retiran las copas de los vasos que contienen microorganismos o medios.
Mantenga las tapas hacia arriba para evitar la contaminación de los microbios transportados por el aire.

Los medios de cultivo y reactivos que usaremos han sido esterilizados ya sea por autoclave o filtración. Un autoclave es una cámara que utiliza vapor presurizado para matar celdas en superficies o en soluciones, usando temperaturas cercanas a 121° C y presiones de 30-40 psi. (A modo de comparación, la presión atmosférica es de ~15 psi.) La ultrafiltración se utiliza en lugar del autoclave cuando las soluciones contienen compuestos sensibles a la temperatura. Los poros en los filtros suelen tener 0.2 o 0.45 μm de diámetro. Estos poros son lo suficientemente pequeños para evitar el paso de bacterias, pero no de virus o macromoléculas.