1.3: Resumen del curso
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El curso se puede ver como una serie de seis unidades relacionadas (ver página opuesta).
- Boot camp: Los estudiantes se familiarizarán con el equipo básico de laboratorio y las técnicas para el manejo y visualización de la levadura. Los estudiantes también serán introducidos a algunas de las muchas bases de datos en línea, que son fuentes importantes de información de genes y proteínas.
- Cepas de deleción de levaduras: Los estudiantes utilizarán medios de crecimiento selectivo y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para identificar tres mutantes de S. cerevisiae, a cada uno de los cuales le falta un solo gen involucrado en la síntesis de Met o Cys (Winzeler et al., 1999). Los estudiantes utilizarán una de las cepas de deleción para los experimentos restantes del semestre.
- Identificación de plásmidos: Los estudiantes aislarán plásmidos de sobreexpresión de levadura de stocks bacterianos y usarán endonucleasas de restricción para identificar los plásmidos. Un plásmido contiene el gen MET de E. cerevisiae que falta en su cepa de levadura (Gelperin et al., 2005). Un segundo plásmido porta el homólogo de S. pombe para el gen MET de S. cerevisiae, y el tercer plásmido porta un gen bacteriano no relacionado.
- Transformación y complementación: Los estudiantes transformarán su cepa ∆met de levadura con los tres plásmidos. Los estudiantes utilizarán placas selectivas para determinar si los genes codificados por plásmidos complementan las deleciones met en cepas transformadas.
- Análisis de la expresión de proteínas: Los estudiantes utilizarán Western blots para analizar la expresión de genes codificados por plásmidos. Las proteínas codificadas por plásmidos son proteínas de fusión con epítopos en sus extremos C que pueden ser reconocidos por anticuerpos.
- Experimento diseñado por equipos: Los equipos diseñarán y llevarán a cabo sus propios experimentos, basados en preguntas surgidas durante los experimentos anteriores.
Resumen de los experimentos del semestre