9.9: Aislamiento de factores de transcripción
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Ejemplo: Aislamiento del represor lac
Una célula de E. coli contiene solo 10-20 copias del represor lac. Esto representa una relación de solo 1 molécula en 50,000 moléculas de proteína en la célula. Sin embargo, la especificidad del represor lac para la secuencia de ADN del operador proporciona un mecanismo para pescarlo fuera de la mezcla.
Cromatografía de afinidad
Se lleva a cabo el siguiente procedimiento para un cromatógrafo de afinidad:
- Aprender la secuencia a la que se une el represor (por huella).
- Sintetizar un segmento de ADN que contenga la secuencia.
- Adjuntar esta molécula artificial a perlas de un medio inerte, sólido (la matriz).
- Vierte un extracto de células de E. coli sobre las perlas.
- Solo las moléculas específicas para la secuencia de ADN —en este caso, moléculas del represor lac — se unirán a las perlas.
- Después de que las moléculas de proteína irrelevantes hayan pasado por la columna, lave las perlas con un tampón que liberará las moléculas represivas lac para que puedan ser estudiadas.