1.4: Carga y Funcionamiento de Gel
- Page ID
- 57436
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)
\( \newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\)
\( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\)
\( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\)
\( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
\( \newcommand{\id}{\mathrm{id}}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
\( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\)
\( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\)
\( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\)
\( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\)
\( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\)
\( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\)
\( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\AA}{\unicode[.8,0]{x212B}}\)
\( \newcommand{\vectorA}[1]{\vec{#1}} % arrow\)
\( \newcommand{\vectorAt}[1]{\vec{\text{#1}}} % arrow\)
\( \newcommand{\vectorB}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vectorC}[1]{\textbf{#1}} \)
\( \newcommand{\vectorD}[1]{\overrightarrow{#1}} \)
\( \newcommand{\vectorDt}[1]{\overrightarrow{\text{#1}}} \)
\( \newcommand{\vectE}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash{\mathbf {#1}}}} \)
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)
\(\newcommand{\avec}{\mathbf a}\) \(\newcommand{\bvec}{\mathbf b}\) \(\newcommand{\cvec}{\mathbf c}\) \(\newcommand{\dvec}{\mathbf d}\) \(\newcommand{\dtil}{\widetilde{\mathbf d}}\) \(\newcommand{\evec}{\mathbf e}\) \(\newcommand{\fvec}{\mathbf f}\) \(\newcommand{\nvec}{\mathbf n}\) \(\newcommand{\pvec}{\mathbf p}\) \(\newcommand{\qvec}{\mathbf q}\) \(\newcommand{\svec}{\mathbf s}\) \(\newcommand{\tvec}{\mathbf t}\) \(\newcommand{\uvec}{\mathbf u}\) \(\newcommand{\vvec}{\mathbf v}\) \(\newcommand{\wvec}{\mathbf w}\) \(\newcommand{\xvec}{\mathbf x}\) \(\newcommand{\yvec}{\mathbf y}\) \(\newcommand{\zvec}{\mathbf z}\) \(\newcommand{\rvec}{\mathbf r}\) \(\newcommand{\mvec}{\mathbf m}\) \(\newcommand{\zerovec}{\mathbf 0}\) \(\newcommand{\onevec}{\mathbf 1}\) \(\newcommand{\real}{\mathbb R}\) \(\newcommand{\twovec}[2]{\left[\begin{array}{r}#1 \\ #2 \end{array}\right]}\) \(\newcommand{\ctwovec}[2]{\left[\begin{array}{c}#1 \\ #2 \end{array}\right]}\) \(\newcommand{\threevec}[3]{\left[\begin{array}{r}#1 \\ #2 \\ #3 \end{array}\right]}\) \(\newcommand{\cthreevec}[3]{\left[\begin{array}{c}#1 \\ #2 \\ #3 \end{array}\right]}\) \(\newcommand{\fourvec}[4]{\left[\begin{array}{r}#1 \\ #2 \\ #3 \\ #4 \end{array}\right]}\) \(\newcommand{\cfourvec}[4]{\left[\begin{array}{c}#1 \\ #2 \\ #3 \\ #4 \end{array}\right]}\) \(\newcommand{\fivevec}[5]{\left[\begin{array}{r}#1 \\ #2 \\ #3 \\ #4 \\ #5 \\ \end{array}\right]}\) \(\newcommand{\cfivevec}[5]{\left[\begin{array}{c}#1 \\ #2 \\ #3 \\ #4 \\ #5 \\ \end{array}\right]}\) \(\newcommand{\mattwo}[4]{\left[\begin{array}{rr}#1 \amp #2 \\ #3 \amp #4 \\ \end{array}\right]}\) \(\newcommand{\laspan}[1]{\text{Span}\{#1\}}\) \(\newcommand{\bcal}{\cal B}\) \(\newcommand{\ccal}{\cal C}\) \(\newcommand{\scal}{\cal S}\) \(\newcommand{\wcal}{\cal W}\) \(\newcommand{\ecal}{\cal E}\) \(\newcommand{\coords}[2]{\left\{#1\right\}_{#2}}\) \(\newcommand{\gray}[1]{\color{gray}{#1}}\) \(\newcommand{\lgray}[1]{\color{lightgray}{#1}}\) \(\newcommand{\rank}{\operatorname{rank}}\) \(\newcommand{\row}{\text{Row}}\) \(\newcommand{\col}{\text{Col}}\) \(\renewcommand{\row}{\text{Row}}\) \(\newcommand{\nul}{\text{Nul}}\) \(\newcommand{\var}{\text{Var}}\) \(\newcommand{\corr}{\text{corr}}\) \(\newcommand{\len}[1]{\left|#1\right|}\) \(\newcommand{\bbar}{\overline{\bvec}}\) \(\newcommand{\bhat}{\widehat{\bvec}}\) \(\newcommand{\bperp}{\bvec^\perp}\) \(\newcommand{\xhat}{\widehat{\xvec}}\) \(\newcommand{\vhat}{\widehat{\vvec}}\) \(\newcommand{\uhat}{\widehat{\uvec}}\) \(\newcommand{\what}{\widehat{\wvec}}\) \(\newcommand{\Sighat}{\widehat{\Sigma}}\) \(\newcommand{\lt}{<}\) \(\newcommand{\gt}{>}\) \(\newcommand{\amp}{&}\) \(\definecolor{fillinmathshade}{gray}{0.9}\)Carga y Funcionamiento del Gel usando MiniOne Instrucciones
Uso de electroforesis en gel de agarosa para la visualización de ADN digerido.
Video ejemplo de verter y ejecutar un gel
| Nombre del reactivo | Temperatura de almacenamiento |
|---|---|
| Agarosa | Temperatura de la habitación |
| 1x TBE | Temperatura de la habitación |
| Verde Sibr/Sibrsafe/Gelred | Temperatura de la habitación (Mantener en lugar oscuro) |
| ADN digerido | \(4^{\circ}C\) |
| Escalera de ADN | Temperatura de la habitación |
| Tinte de carga | Temperatura de la habitación |
Consejos antes de comenzar:
Comienza haciendo una botella de 500 ml de stock de 1x TBE (C1V1=C2V2) para el tampón de funcionamiento de tu equipo y para hacer geles de agarosa. (Puedes almacenar esto para uso futuro- ¡etiquete la botella con claridad!) Utilizará un búfer de stock TBE 10X, 25X o 50X— ¡Preste atención a qué solución de stock se le ha proporcionado!
Procedimiento:
- Harás 30ml de agarosa que es 1X TBE y generalmente 0.75-1.5% de agarosa. (Consulte el Apéndice V para obtener sugerencias sobre qué porcentaje usar. )
a. Medir ___ g de agarosa (0.75-1.5%)
b. Agregar ___ mL de 1x tampón TBE.
- Calienta el gel durante 1+ min en microondas — (¡Usa matraces de plástico! ). ¡Gira para asegurarte de que todos los cristales están en solución!
- Deja que el gel se enfríe por 1 minuto.
- Agregue 2-3\(\mu L\) de SybrGreen, SybrSafe o GelRed (pregunte a su instructor dónde se almacena esto; mantenga el tubo en la oscuridad en todo momento)
- Deja que el gel se enfríe un minuto más - No viertas CALIENTE!!!!!
- Divide la agarosa tibia entre los dos recipientes de gel (solo necesitarás uno). No olvides los peines.
- Carga 5\(\mu L\) de tu escalera de ADN por carril de gel. (Tu escalera de ADN debe estar preferentemente en el primer carril de tu gel).
- Cargue sus muestras en los pocillos del gel, y marque en su cuaderno el orden en que cargó los carriles. a. cargando sus muestras: 5\(\mu L\) de ADN mezclado con 1\(\mu L\) de colorante de carga 6x. Cargar esto directamente en el pozo.
- Ejecutar el gel durante 20 min en la plataforma de gel (configurado de acuerdo con los diagramas a continuación). Mientras el gel está funcionando, simule el (los) resumen (s) en su cuaderno de laboratorio (físico/digital), agregando la Quick-Load Purple 1 kb Plus DNA Ladder como su escalera y pegue la imagen del gel esperado en sus notas. Tome una foto de sus resultados reales de gel y peguelos en su cuaderno de laboratorio.
El gel se puede visualizar en la plataforma de gel (luz azul) o para mayor sensibilidad en la caja de luz UV. ADVERTENCIA: La luz UV es peligrosa. ¡No uses a menos que hayas hablado con tu profesor!
Consulte el Apéndice V para cualquier duda que pueda tener sobre el gel de agarosa o el protocolo de electroforesis