2.2: Apéndice II- Uso del Denovix
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Mira los videos de YouTube sobre preguntas para el DeNovix.
(https://www.youtube.com/user/denovixvideos/videos)
El Denovix permite medir la concentración de ADN, ARN y proteína en un par de microlitros de la solución. Lo mejor es usar 1.5\(\mu L\) a 2\(\mu L\) para mediciones precisas. También tiene la capacidad de medir moléculas marcadas fluorescentemente.
Startup Denovix tocando la pantalla. Establecer parámetros para medir ácido nucleico/ADN bicatenario (ADNds).
- Limpia Denovix. Pipetee 5-10\(\mu L\) de agua en el pedestal (parte metálica que estaba debajo del brazo con un orificio en el medio), cierre el brazo y luego limpie el agua con una toallita Kim-wipe (sin toallas de papel).
- Ahora necesitarás medir un espacio en blanco. (Este debe ser el mismo líquido en el que se disuelve tu muestra). Usa el tampón de elución que usas en tu miniprep Zymopure. Levante el brazo metálico y pipetee 2\(\mu L\) de su líquido en blanco sobre el pedestal. (Evite introducir burbujas.)
4. Suavemente baje el brazo y haga clic en el botón en blanco en la pantalla.
5. Cuando esté completo, levante el brazo y simplemente limpie con una toallita Kim-wipe (¡no use una toalla de papel!).
Ya está listo para medir múltiples muestras.
(Se recomienda volver a poner en blanco el instrumento cada 30 min.)
6. Agrega 1.5 o 2\(\mu L\) de tu muestra de ADN y haz clic en medir en la pantalla.
Nota: No es necesario limpiar con agua entre muestras. Simplemente seque el pedestal cuando esté listo para la siguiente muestra. Repita para todas las muestras.
7. Registrar la concentración de ADN (ng/\(\mu L\)), relaciones 260/280 y 260/230 para todas las muestras.
260/280 = una relación de ~1.7- 1.80 se considera ADN puro (valor más importante) Las relaciones
260/230 están comúnmente en el rango de 2.0-2.2 (puede variar mucho)
8. Limpia Denovix. Pipeta 10\(\mu L\) de agua en el pedestal, cierra el brazo y luego limpia el agua con una toallita
Kim-wipe... luego cierra el programa. (Presione el botón de inicio.)
¿Qué significan mis valores?
Enlace al sitio web de DeNovix para obtener más información: https://www.denovix.com/tn-130-purity-ratios-explained/
- Relaciones de pureza de ácido nucleico 260/280
“Las proporciones 260/280 se utilizan rutinariamente para determinar la pureza de las mediciones de ácidos nucleicos. Esta relación se usa más comúnmente para determinar la presencia de proteína y/o fenol en la muestra de ácido nucleico aislada. En el Cuadro 1 se describe un rango general aceptable para estas proporciones; sin embargo, no son garantía de pureza de la muestra”.
- Relaciones de pureza de ácido nucleico 260/230
“La relación 260/230 se utiliza para indicar la presencia de compuestos orgánicos no deseados como Trizol, fenol, Guanidina HCL y tiocianato de guanidina. Las relaciones generalmente aceptables de 260/230 están en el rango de 2.0 — 2.2. Valores superiores a este pueden indicar contaminación con los compuestos antes mencionados”.
Una relación 260/280 por debajo de 1.5 no hace que el ADN sea inadecuado para ninguna aplicación, pero proporciones más bajas indican que hay más contaminantes proteicos presentes que pueden interferir con las etapas aguas abajo. 260/230 mide el residuo contaminantes del proceso de purificación. Las proporciones bajas pueden indicar ADN impuro que será menos exitoso en etapas posteriores.