2.3: Apéndice III- Uso de la Nanodrop
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Mira los videos de YouTube sobre preguntas para el NanoDrop.
(https://www.youtube.com/watch?v=y3ICiycWeCA&t)
El NanoDrop permite medir la concentración de ADN, ARN y proteína en un par de microlitros de la solución. Lo mejor es usar 1.5\(\mu L\) a 2\(\mu L\) para mediciones precisas. Algunos modelos tienen la capacidad de medir moléculas etiquetadas fluorescentemente.
Procedimiento:
-
Lavar el pedestal NanoDrop. Levante la parte superior del brazo del NanoDrop y retire la toallita.
Agregue 4‐5\(\mu L\) de agua purificada al pedestal inferior y luego baje el brazo.
Espere 30‐60 segundos.
Levante la parte superior del brazo y use la toallita para fregar vigorosamente los pedestales superior e inferior. - Abra el software NanoDrop en la computadora haciendo doble clic en el ícono “ND-1000” que se parece un poco a un reloj de arena
-
Inicializar el NanoDrop:
Haga clic en el botón “Ácido nucleico” en el software NanoDrop. Esto abre el cuadro de diálogo q; NO haga clic en “bien” hasta que haya agregado agua.
Agregue 2\(\mu L\) de agua purificada al pedestal inferior, luego baje la parte superior del brazo.
Haga clic en “bien” en la computadora y espere unos 20 segundos mientras el NanoDrop se inicializa
Cuando termine, levante la parte superior del brazo y séquelo con una toallita -
Blanquear el NanoDrop:
Agrega 2\(\mu L\) del búfer en el que se encuentra tu muestra (muy probablemente tampón de elución).
Baje la parte superior del brazo del NanoDrop y haga clic en el botón “Blank” en el software.
Espere unos 20 segundos para que se realice la medición de la pieza en bruto.
Levante la parte superior del brazo y seque el pedestal con una toallita -
Mida su Muestra:
Agrega 2\(\mu L\) de tu muestra al pedestal inferior, luego baja la parte superior del brazo.
En el cuadro “ID de muestra”, escriba el nombre de su muestra.
Haga clic en el botón “Medir” en el software y espere unos 20 segundos para que se complete la medición.
Levante la parte superior del brazo y seque el pedestal O levante la parte superior del brazo y pipetea con cuidado la mayor cantidad de muestra que pueda para retenerla para su uso posterior. -
Recopilación de Datos:
Anote cualquier medida que le interese.
Haga clic en el botón “Imprimir pantalla” para imprimir el espectro completo si lo desea.
Cuando termine de hacer todas las medidas, haga clic en “Imprimir informe” para obtener una tabla con todos los datos. -
Limpieza del Pedestal:
Agregue 4-5\(\mu L\) de agua purificada al pedestal inferior, luego baje el brazo.
Espere 30-60 segundos.
Levante la parte superior del brazo y use una toallita para fregar vigorosamente tanto los pedestales superior como inferior.
Coloque una nueva toallita de laboratorio doblada en el pedestal inferior y cierre la parte superior del brazo. - Apague y cierre la computadora NanoDrop.
Más información sobre lo que significan estos valores de NanoDrop: