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8.4: Cargar y ejecutar el gel de agarosa

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    1. Cuando el gel se haya fraguado, retire con cuidado el peine y las cuñas negras.
    2. Orientar el gel en el tanque de electroforesis de tal manera que los pozos (agujeros hechos por el peine) estén orientados hacia el electrodo negro (negativo). Las moléculas de ADN se moverán desde el pozo hacia el electrodo rojo (positivo). Llene el tanque con suficiente tampón TAE para sumergir el gel (aprox. 275-300 mL).
    3. Cargue una muestra a cada pozo, que puede acomodar ~20 μL. Cargar 10-12 μL de una muestra de PCR a cada carril. Trate de evitar las burbujas de aire mientras carga las muestras.
    4. Cargar estándar de peso molecular de 5 μL a un carril del gel. Asegúrate de haber registrado con precisión la ubicación de cada muestra en el gel.
    5. Coloque la tapa en el tanque de electroforesis y conecte los electrodos a la fuente de alimentación (negro a negro y rojo a rojo). ¡Asegúrate de que la polaridad es correcta antes de continuar!
    6. Encienda la alimentación y aplique un voltaje constante de 125 V.
    7. Presta mucha atención al gel a medida que corre. Apague la alimentación cuando el azul de bromofenol esté a ~ 2 cm del extremo del gel. No permita que el tinte se salga del gel, ya que se perderán pequeñas moléculas de ADN. (Piense en el tamaño de sus productos de PCR.)

    This page titled 8.4: Cargar y ejecutar el gel de agarosa is shared under a CC BY-NC-SA license and was authored, remixed, and/or curated by Clare M. O’Connor.