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9.12: Elaboración de ADN recombinantes

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    Los biólogos moleculares suelen crear ADN recombinantes al unir fragmentos de ADN de diferentes fuentes. Una razón para hacer moléculas de ADN recombinante es permitir la producción de una proteína específica que sea de interés. Por ejemplo, es posible diseñar una molécula de ADN recombinante que contenga el gen de la hormona del crecimiento humana e introducirlo en un organismo como una bacteria o levadura, lo que podría hacer cantidades masivas de la proteína de la hormona de crecimiento humana de manera muy barata. Para ello, es necesario establecer las condiciones adecuadas para que la proteína se haga en las células diana. Para las bacterias, esto implica típicamente el uso de plásmidos. Los plásmidos son ADN circulares, que se replican autónomamente, que se encuentran comúnmente en células bacterianas. Plásmidos utilizados en métodos de ADN recombinante

    1. replicarse en números altos en la célula hospedadora;
    2. llevar marcadores que permitan a los investigadores identificar las células que los portan (resistencia a los antibióticos, por ejemplo) y
    3. contienen secuencias (tales como un promotor y una secuencia Shine Dalgarno) necesarias para la expresión de la proteína deseada en la célula diana. Un plásmido que tiene todas estas características se denomina vector de expresión (ver un ejemplo en la figura de la izquierda).

    Los plásmidos pueden extraerse del huésped, y cualquier gen de interés puede insertarse en ellos, antes de devolverlos a la célula huésped. La elaboración de tales plásmidos recombinantes es un proceso relativamente sencillo. Implica

    1. cortar el gen de interés con una enzima de restricción (endonucleasas que cortan en secuencias de ADN específicas);
    2. cortar el ADN plasmídico de expresión con enzima de restricción, para generar extremos que sean compatibles con los extremos del gen de interés;
    3. unir el gen de interés al ADN plasmídico usando ADN ligasa;
    4. introducir el plasmit recombinante en una célula bacteriana; y
    5. células en crecimiento que contienen el plásmido. Las células bacterianas que portan el plásmido recombinante pueden inducirse entonces para expresar el gen insertado y producir grandes cantidades de la proteína codificada por él.
    Figura 9.12.1: Un vector de expresión

    Colaboradores

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