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6.3: Auxótrofos y medios selectivos

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Los mutantes met son auxótrofos de Met, lo que significa que son incapaces de crecer en medios que no contienen Met. Los auxótrofos son microorganismos que son incapaces de sintetizar un nutriente esencial debido a una mutación génica. Muchas cepas de laboratorio portan múltiples mutaciones que interfieren con la síntesis de nutrientes esenciales. Por ejemplo, debido a que la cepa BY4742 porta mutaciones en los genes HIS3, LEU2, LYS2 y URA3, la cepa solo crecerá en medios que contengan histidina, leucina, lisina y uracilo. Las cepas auxotróficas tienen muchos usos en genética. Los investigadores suelen utilizar cepas auxotróficas como hospedadores para la transformación plasmídica (Capítulo 12). Los plásmidos utilizados para la transformación portan alelos funcionales de un gen defectuoso en la cepa huésped, lo que permite seleccionar transformantes por su capacidad de crecer en medios que carecen del nutriente esencial.

Los medios sintéticos son una herramienta esencial para cultivar y estudiar auxótrofos, ya que todos los componentes están definidos. Los investigadores de levaduras han desarrollado una variedad de formulaciones diferentes para medios sintéticos. Todos los medios sintéticos contienen una fuente de carbono (generalmente D-glucosa), una fuente de nitrógeno y vitaminas y minerales esenciales. Las vitaminas y minerales suelen adquirirse
en una formulación conocida como base nitrogenada de levadura (YNB). Los suplementos añadidos a los medios sintéticos se pueden adaptar para apoyar o seleccionar contra el crecimiento de genotipos particulares. En este curso, utilizaremos medio Yeast Complete (YC) que soporta el crecimiento de la mayoría de las cepas de S. cerevisiae. La tasa de crecimiento de cepas de tipo silvestre en YC es algo más lenta que en medios ricos como YPD, pero las cepas son viables por largos períodos de tiempo. En la tabla de la siguiente página se muestra la composición de YC, que incluye un rico aporte de aminoácidos y bases nucleotídicas. Además del medio YC completo, también utilizaremos medios selectivos en los que se han dejado fuera algunos de los componentes. Por ejemplo, en este laboratorio, usaremos medios de “deserción” YC-Met, que contienen todos los componentes de YC en la siguiente tabla, excepto la metionina.

*YNB es una mezcla compleja de vitaminas, minerales y sales. Concentraciones finales en YC: Vitaminas (μg/litro): biotina (2), pantotenato de calcio (400), ácido fólico (2), inositol (2000), niacina (400), ácido p-aminbenzoico (200), clorhidrato de piridoxina (400), riboflavina (200), clorhidrato de tiamina (400).
Minerales (μg/litro): ácido bórico (500), sulfato de cobre (40), yoduro de potasio (100), cloruro férrico (200), sulfato de manganeso (400), molibdato de sodio (200), sulfato de zinc (400).
Sales (mg/litro): fosfato de potasio monobásico (1000), sulfato de magnesio (500), cloruro de sodio (100), cloruro de calcio (100).
(Fuente: Labs.fhcrc.org/gottschling/ye... tocols/yc.html)

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