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Las técnicas para transformar organismos microbianos con ADN extraño son esenciales en la biología molecular moderna. En este laboratorio,
transformará una cepa met de S. cerevisiae con tres plásmidos diferentes y utilizará la complementación ura3 para detectar
células transformadas. Luego utilizará la siembra en placa de réplica para determinar si los genes Met de S. pombe son funcionalmente equivalentes a los genes MET de S. cerevisiae.

Objetivos

Al final de este laboratorio, los estudiantes deben ser capaces de:

• explicar los procesos de transformación y complementación a nivel molecular.
• diseñar una estrategia de selección para aislar cepas transformadas
• transformar S. cerevisiae con plásmidos y aislar transformantes en medios selectivos
• utilizar la placa de réplica para analizar la capacidad de los genes MET codificados por plásmidos para complementar las deficiencias satisfechas

En este experimento, puede recibir una respuesta preliminar a la pregunta de investigación del semestre sobre la conservación funcional de las proteínas Met en la Ascomycota. Durante la primera parte del semestre, su equipo utilizó siembra selectiva y PCR de colonias para identificar mutantes de deleción de levaduras. Luego aisló y caracterizó plásmidos que pueden ser utilizados para sobreexpresar proteínas Met. Estos dos conjuntos de experimentos se unen en este laboratorio, cuando se transforma la cepa de deleción de S. cerevisiae con los plásmidos de expresión. A través de una serie de experimentos de complementación, se determinará si los genes portados en los plásmidos son capaces de compensar los genes MET faltantes en los mutantes. En complementación, el gen introducido restaura el fenotipo normal a un mutante con un gen defectuoso.

This page titled 12: Transformación de levadura is shared under a CC BY-NC-SA license and was authored, remixed, and/or curated by Clare M. O’Connor.