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11.8: Gel Secante

Última actualización

29 oct 2022
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- 11.7: Polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción
- 11.9: Cribado Genético para Fenilcetonuria

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La transferencia en gel es una técnica para visualizar un subconjunto particular de macromoléculas —proteínas, o fragmentos de ADN o ARN— inicialmente presentes en una mezcla compleja. Los pasos:

Separar las moléculas por electroforesis. Esto se hace en un gel que permite que las moléculas migren bajo la influencia del campo eléctrico.
“Secarlos” con un filtro de nitrocelulosa. Por razones desconocidas, las moléculas se adhieren firmemente al filtro y conservarán sus posiciones relativas cuando se inunden con líquido en el siguiente paso.
Baña el filtro con una solución que contenga una “sonda”: una molécula que se combinará específicamente con las moléculas diana; es decir, la (s) que estás buscando y lleva una media de visualización, por ejemplo, un marcador radiactivo o fluorescente.

Southern Blot

El diagrama ilustra el procedimiento para detectar fragmentos de ADN que contienen una secuencia particular. El ADN se extrae de la célula y se digiere parcialmente por una endonucleasa de restricción. Los fragmentos de ADN resultantes se separan por electroforesis y luego se desnaturalizan para formar moléculas monocatenarias (ADNss). Sin alterar sus posiciones, las bandas separadas de ADNss se transfieren a un filtro de nitrocelulosa y se exponen a ADNc o ARN radiomarcado. Si la sonda detecta secuencias de ADN complementarias, se unirá a ellas. La presencia de la sonda en una banda particular se revela mediante autorradiografía.

alt — Figura $\PageIndex{1}$ : Southern Blotting

Este procedimiento fue desarrollado por E. M. Southern y el producto terminado se denomina “Southern blot”. El mismo procedimiento básico también se puede utilizar para separar y visualizar moléculas de ARN y moléculas de proteína. Como extensión humorística del término “Southern blot”, estas han sido denominadas “Northern” y “Western” blots, respectivamente (Tabla $\PageIndex{1}$ ).

Tabla $\PageIndex{1}$ : Resumen o Blots en gel comunes
Tipo de Blot	Moléculas separadas por electroforesis	Sonda
Sur	ssDNA	ADNc o ARN
Norte	ARN desnaturalizado	ARN o ADNc
Western	Proteína	Anticuerpos

Southern Blot

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