8.8: D1S80 VNTR (Genotipado)
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El marcador de minisatélites D1S80 se encuentra en 1p35-p36. Este VNTR tiene 16 bases de largo. Con una variación de alelos entre 3-24 repeticiones, el locus muestra suficiente diversidad para ayudar a distinguir entre las personas. Aunque este no es un marcador CoDiS, se requiere el uso de múltiples loci para identificar definitivamente las muestras. La repetición grande (16 pb) permite el uso de electroforesis en gel de agarosa estándar para explorar la diversidad de este locus en nuestro laboratorio. Los productos de PCR varían de 430bp a 814bp de largo.
- D1S80-para: 5′-GAAACTGGCCTCCAAACACTGCCCGCCG-3′
- D1S80-rev: 5′-GTCTTGTTGGAGATGCACGTGCCCCTTGC-3′
- PCR de las muestras de ADN extraídas de las células de las mejillas usando las Perlas de PCR.
- Vierta 2% de agarosa en el aparato de fundición en el refrigerador.
- Se necesitan hacer 2 geles por clase → 100ml de TBE con agarosa 2g
- Agregue 5μl de solución segura SYBR en la agarosa fundida antes de colar.
- Coloca 2 juegos de peines en el gel → en un extremo y en el medio
- Cargar el gel con una escalera de ADN.
- La muestra es de la PCR.
- Ejecutar el gel a 120V durante 20 minutos.
- Visualice en el transiluminador UV.
Resultados de ejemplo
1. ¿Cuántos alelos hay visibles en cada carril?
2. ¿Los genotipos son distinguibles entre individuos?
3. ¿Alguno de los alelos es común entre muestras individuales?