3.1.11: Linealización de Suministros Backbone
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Linealización de esqueletos:
|
Materiales |
Cantidad necesaria: (Reacción por columna vertebral) |
|
Mezcla maestra 2X de alta fidelidad Q5 (Cat #: M0492S) |
Hasta 25 uL |
|
10 uM de imprimación directa (SB-Prep-3P-1) |
Hasta 2.5 uL |
|
10 uM Imprimación inversa (SB-Prep-2EA) |
Hasta 2.5 uL |
|
ADN molde (pSB1c3, A3, K3, T3) |
10 ng |
|
Agua Destilada |
Hasta 60 uL |
|
Termociclador |
1 |
|
Espectrofotómetro UV |
1 |
|
Micropipeta y Puntas |
1-10 uL, 0.2-1 uL, 20-200 uL |
|
Bloque térmico (80C) |
1 |
|
Rig de gel |
1 |
|
Kit de limpieza de PCR (Cat #: D4033) |
1 |
|
10X Búfer NEB 2.1 |
4 uL |
|
Enzimas de digestión (EcoRI, PstI, DpNi) |
1 uL de cada |
|
Células de bacterias competentes (JM109= Cat#: T3003) |
25 uL |
|
Placa de Agar LB con Antibiótico (Chlor, Amp, Tet, Kan) |
1 plato (dependiendo de la columna vertebral) |
|
Perlas de Vidrio Estéril |
Aproximadamente 4-8 cuentas |
|
Medios SOC (Cat#: 15544034) |
200 uL |
|
Incubadora de agitación (37C) |
1 |
|
ADN ligasa T4 (Cat #: M0202S) |
0.5 uL |
|
T4 ADN Ligasa Buffer (Cat#: B0202S) |
1 uL |