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9.11: Secado

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    La transferencia proporciona un medio para identificar moléculas específicas de una mezcla. Emplea tres pasos principales. Primero, la mezcla de moléculas se separa por electroforesis en gel. La mezcla podría ser ADN (Southern Blot), ARN (Nothern Blot) o proteína (Western Blot) y el gel podría ser agarosa (para ADN/ARN) o poliacrilamida (para proteína). Segundo, una vez que se completa el ciclo del gel, las proteínas o ácidos nucleicos en el gel se transfieren fuera del gel a una membrana/papel que se une físicamente a las moléculas. Esta “mancha”, como se le llama, tiene una huella de las bandas de ácido nucleico o proteína que estaban en el gel (ver figura a la izquierda). La transferencia se puede lograr por difusión o mediante el uso de una corriente eléctrica para mover las moléculas del gel a la membrana. La membrana puede tratarse para unir covalentemente las bandas a la superficie de la transferencia. Por último, se agrega a la membrana un agente de visualización específico para la molécula de interés en la mezcla. Para ADN/ARN, esa podría ser una secuencia de ácido nucleico complementaria que se marca de alguna manera (radiactividad o colorante). Para una proteína, normalmente implicaría un anticuerpo que se une específicamente a la proteína de interés. El anticuerpo unido puede entonces ser dirigido por otro anticuerpo específico para el primer anticuerpo. El anticuerpo secundario suele estar unido a una enzima que, en presencia del reactivo correcto, cataliza una reacción que produce una señal (color o luz) que indica dónde se une el anticuerpo. Si la molécula de interés está en la mezcla original, se “iluminará” y se revelará.

    Figura 9.11.1: Procedimiento de transferencia Northern

    Colaboradores

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