3.4: Detección Cuantitativa de Proteína (Actividad)
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Antecedentes Experimentales
La albúmina sérica bovina (BSA) es una proteína que circula en la sangre de las vacas. Se puede usar BSA purificada con solución de Biuret en diluciones seriadas para generar una Curva Estándar. La curva estándar ilustrará la relación entre la concentración (la variable dependiente) y la absorbancia a 540 nm (la variable independiente). Luego podemos usar esta curva para estimar la concentración de muestras desconocidas.
1. En una gráfica, ¿recuerdas qué eje es el dependiente y cuál es la variable independiente?
2. En la siguiente tabla, ¿puede identificar qué muestras son los controles negativos y cuáles son los controles positivos?
3. ¿Cuál es la predicción de la absorbancia o intensidad de color de los diferentes tubos?
Estándares BSA diluidos
- Etiquetar 9 tubos 1-9.
- Combine los componentes de la tabla a continuación para generar la concentración adecuada de soluciones.
- Colocar el tubo 1 (blanco) en una cubeta y medir la absorbancia (A) en el espectrofotómetro a 540 nm.
- Calibrar el espectrofotómetro para leer 0 a A 540nm.
- Lea secuencialmente cada muestra a A 540nm y registre los valores en la siguiente tabla.
- Trazar cada dilución de BSA en un programa de hoja de cálculo como Excel como un diagrama de dispersión.
- Genere la línea de mejor ajuste para estos estándares con la ecuación de la línea.
- Utilice la ecuación de la línea para estimar la concentración de la muestra desconocida.
Ajuste de curva
Ejecute la simulación a continuación para comprender cómo puedes usar la serie de dilución estándar para estimar las concentraciones de tus muestras.
Haga clic en la imagen de arriba para comenzar la simulación sobre el ajuste de curvas.
Tutorial de diagrama de dispersión
Usa el tutorial a continuación y mira a 1.25X para trazar tus propios datos.