11: Expresión génica
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- 11.1: Introducción
- El ADN fue descrito como una molécula compuesta por 2 hebras antiparalelas en una doble hélice por Francis Crick y James Watson. El elegante modelo ilustró la redundancia intrínseca que convirtió al ADN en un recipiente de almacenamiento de datos adecuado para la información genética. Francis Crick posteriormente planteó una noción de cómo esta información pasó del almacenamiento a un programa real que ejecuta celdas. Crick lo postuló primero como una “hipótesis de secuencia”. Esta idea de flujo de información se llama el Dogma Central de la Biología Molecular.
- 11.2: Transcripción procariota
- La glucosa es la fuente de energía preferida de las células. François Jacob y Jacques Monod buscaron comprender cómo las bacterias tomaban decisiones para cambiar entre diferentes azúcares como fuentes de energía. Jacob y Monod encontraron que si la glucosa y la lactosa se presentaran como alimento para bacterias, habría un patrón de crecimiento bifásico. Monod encontró que cuando la lactosa era el único azúcar, se indujo la expresión de la enzima β-galactosidasa y mostró un crecimiento monofásico con retraso.
- 11.3: Miniprep de ARN (Actividad)
- La purificación de ARN ocurre similar a las preparaciones de ADN. Se utiliza una columna a base de sílica donde se excluye el ADN de la unión en función del tamaño y a través de una etapa adicional de digestión del ADN usando la enzima DNasa I. El ARN es extremadamente frágil y propenso a la degradación. Por lo tanto, las pipetas y plásticos separados se utilizan generalmente en los laboratorios para reducir la cantidad de exposición a RNasa ambiental o experimental. Esta página contiene instrucciones sobre cómo preparar ARN y realizar una transcripción inversa de ARNm eucariota
- 11.4: Medición cuantitativa de ácidos nucleicos
- Se pueden realizar mediciones de genes individuales de interés a través de PCR de esos genes específicos. Se utiliza un proceso conocido como PCR en tiempo real o PCR cuantitativa (qPCR) para medir genes individuales mediante mediciones de fluorescencia. Un agente intercalante que se une solo al ADN bicatenario llamado Sybr Green se usa en una máquina de qPCR que está midiendo la fluorescencia después de cada ciclo de PCR indica indirectamente la cantidad de producto amplificado.
- 11.5: Transcripción eucariota
- A diferencia de los genes procariotas, la expresión de genes en células eucariotas tiene sistemas complejos de factores de transcripción que actúan sobre promotores para reclutar ARN polimerasas. Adicionalmente, los elementos potenciadores pueden residir muchas kilobases aguas arriba del promotor. Estos potenciadores fortalecen la transcripción del gen. En este caso, las proteínas activadoras de la transcripción o trans-activadores aumentan la actividad promotora.