14.2: Alimentos OGM (Actividad)

Detección PCR de Alimentos GM

Brevemente, el ADN genómico se aislará de los alimentos derivados de la vegetación. La modificación genética se identificará entonces por PCR del promotor vegetal utilizado en ingeniería genética, CaMV 35S. Como control positivo para la extracción apropiada de ADN, se utilizará PCR para tubulina específica de planta.

1. Agregue 100 μL de tampón de lisis a cada tubo que contenga el material vegetal o alimenticio.
2. Gire una maja de plástico limpia contra la superficie interna del tubo de 1.5 mL para moler enérgicamente el tejido vegetal o el producto alimenticio durante 1 minuto.
3. Agregue 900 μL de tampón de lisis a cada tubo que contenga
4. Hervir las muestras durante 5 minutos en un baño de agua
5. Girar durante 2 minutos para peletizar restos de células y alimentos.
6. Transferir 350 μL de cada sobrenadante a un tubo nuevo
7. Añadir 400 μL de isopropanol a cada tubo
8. Mezclar y dejar a temperatura ambiente por 3 minutos.
9. Girar por 5 minutos.
10. Vierta cuidadosamente y deseche el sobrenadante de cada tubo. Pellet seco al aire.
11. Agregue 100 μL de tampón TE a cada tubo. 5 min a temperatura ambiente luego se mantiene en hielo.

PCR para promotor 35S

1. Etiquete un tubo “35S FP” para producto alimenticio.
2. Marcar un tubo “35S WT” para soja de tipo silvestre: Control negativo.
3. Etiqueta “35S RR” para planta de soya Roundup Ready®: Control positivo.
4. Diferentes grupos solo harán un control.
5. Agregue 22.5 μL de la mezcla de imprimación 35S/colorante de carga a cada tubo que contenga perla de PCR.
   • 5′-CCGACAGTGGTCCCAAAGATGGAC-3′ (Imprimación hacia adelante)
   • 5′-ATATAGAGGAAGGGTCTTGCGAAGG-3′ (Imprimación inversa)
6. Agregue 2.5 μL de ADN de producto alimenticio al tubo de reacción marcado como “35S FP”.
7. Agregue 2.5 μL de ADN de soja de tipo silvestre o Roundup Ready® al tubo de reacción apropiado marcado como “35S WT” o “35S RR”.

PCR para tubulina: (Control Positivo para Calidad del ADN y Condiciones de PCR)

1. Etiquete un tubo “T FP” para producto alimenticio.
2. Marcar un tubo “T WT” para soja de tipo silvestre.
3. Etiqueta “T RR” para la planta de soya Roundup Ready®.
4. Diferentes grupos solo harán un control.
5. Agregue 22.5 μL de la mezcla de imprimación de tubulina/colorante de carga a cada tubo que contenga perla de PCR.
   • 5′-GGGGATCCACTTCATGCTTTCGTCC-3′ (Imprimación Directa)
   • 5′-GGGGAACCACATCACCACGGTACAT-3′ (Imprimación inversa)
6. Agregue 2.5 μL de ADN del producto alimenticio al tubo de reacción marcado con “T FP”.
7. Agregue 2.5 μL de ADN de soja de tipo silvestre o Roundup Ready® al tubo de reacción apropiado marcado como “T WT” o “T RR”.