3.3A: Microscopía de Campo Oscuro
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Objetivos de aprendizaje
- Generalizar el proceso de microscopía de campo oscuro
Resplandor contra un fondo oscuro
La microscopía de campo oscuro se usa idealmente para iluminar muestras no teñidas, lo que hace que aparezcan brillantemente iluminadas sobre un fondo oscuro. Este tipo de microscopio contiene un condensador especial que dispersa la luz y hace que se refleje en el espécimen en ángulo. En lugar de iluminar la muestra con un cono de luz lleno, el condensador está diseñado para formar un cono hueco de luz. La luz en el ápice del cono se enfoca en el plano del espécimen; a medida que esta luz se mueve más allá del plano del espécimen, se esparce nuevamente en un cono hueco. La lente objetivo se asienta en el hueco oscuro de este cono; aunque la luz viaja alrededor y más allá de la lente objetivo, no entran rayos en ella.
Todo el campo aparece oscuro cuando no hay muestra en la etapa del microscopio; así se llama microscopía de campo oscuro. Cuando una muestra está en el escenario, la luz en el vértice del cono lo golpea. Los rayos dispersos por la muestra y capturados en la lente del objetivo hacen así la imagen.
Las muestras observadas bajo microscopía de campo oscuro deben prepararse cuidadosamente ya que el polvo y otras partículas también dispersan la luz y se detectan fácilmente. Los portaobjetos de vidrio deben limpiarse a fondo de polvo y suciedad extraños. Puede ser necesario filtrar los medios de muestra (agar, agua, solución salina) para excluir contaminantes confusos. Los materiales de muestra deben esparcirse de manera delgada; demasiado material en el portaobjetos crea muchas capas y bordes superpuestos, lo que dificulta la interpretación de las estructuras.
La microscopía de campo oscuro tiene muchas aplicaciones en microbiología. Permite la visualización de bacterias vivas, y distingue alguna estructura (varillas, varillas curvas, espirales o cocos) y el movimiento.
Puntos Clave
- En microscopía de campo oscuro, la luz llega al espécimen desde un ángulo con la ayuda de un disco opaco.
- El ejemplar aparece iluminado contra un fondo oscuro.
- La microscopía de campo oscuro es más útil para organismos vivos extremadamente pequeños que son invisibles en el microscopio óptico.
Términos Clave
- condensador: Una lente (o combinación de lentes) diseñada para recoger la luz y enfocarla en una muestra o parte de un mecanismo.