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2.2: Espectros de absorbancia

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    Lectura relacionada: Páginas 92-94

    OBJETIVO

    Al finalizar este ejercicio, la discusión apropiada y las lecturas relacionadas, el alumno podrá:

    1. Mida los valores de absorbancia para una solución en una variedad de longitudes de onda.
    2. Construir un gráfico que grafique las longitudes de onda frente a los valores de absorbancia.
    3. Identificar la longitud de onda de absorbancia máxima y mínima para cada solución utilizada.
    4. Explicar la relación entre color de la solución, longitud de onda del espectrofotómetro y absorbancia.

    GLOSARIO

    Máximos y mínimos de absorbancia: aquellas longitudes de onda a las que los compuestos en solución presentan absorbancia mínima o máxima de luz. Estos mínimos y máximos se fijan para un conjunto establecido de condiciones (pH, disolvente y temperatura), pero pueden variar si estas condiciones varían.

    Papel gráfico rectilíneo (lineal): la mayoría de las veces se utiliza papel gráfico, en el que los ejes X (horizontal) e Y (vertical) se dividen en segmentos igualmente espaciados.

    MATERIALES

    • Espectrofotómetro
    • Soluciones de muestra
    • Cubetas

    PROCEDIMIENTO

    1. Llene una cubeta aproximadamente 1/2 llena con agua destilada (agua en blanco).
    2. Llene cubetas adicionales aproximadamente 1/2 llenas con cada una de las cinco soluciones coloreadas (muestra).
    3. Seleccione un espectrofotómetro y ajuste la longitud de onda a 375 nm.
    4. Ajusta el control de cero.
    5. Inserte el blanco de agua y ajústelo para una absorbancia cero (100% de transmitancia).
    6. Retire el blanco e inserte la cubeta de muestra que contiene la solución roja.
    7. Lea la absorbancia y registrela en la hoja de datos.
    8. Lea y registre la absorbancia de cada solución a esta longitud de onda.
    9. Repita los pasos del 3 al 7 para cada longitud de onda indicada en la hoja de datos.
    10. Vacíe las cubetas de muestra y enjuáguelas con agua.
    11. Ajustar el espectrofotómetro a 420 nm y aplicarlo en blanco con agua destilada.
    12. Inserte una tira de papel blanco en una cubeta vacía y coloque la cubeta en el pozo de muestra.
    13. Observe bien la muestra y observe el color de la luz que es visible en la tira de papel. Registre su observación en la hoja de datos.
    14. Repita los pasos 11, 12 y 13 a 540 nm y 610 nm.
    15. Utilizando el papel gráfico proporcionado al final de este ejercicio, construya una gráfica trazando la longitud de onda en el eje X y la absorbancia en el eje Y. Trazar los valores de absorbancia para cada solución coloreada diferente en la misma gráfica., utilizando una tinta o símbolo de diferente color para cada curva.
    FICHA TÉCNICA, EJERCICIO #2

    NOMBRE: ___________

    FECHA: ___________

    SOLUCIONES DE TEST

    Longitud de onda ROJO AZUL VERDE AMARILLO VIOLETA
    375
    400
    425
    450
    475
    500
    525
    550
    575
    600
    625
    650
    Color de la solución Absorbancia máxima Absorbancia Mínima
    Rojo
    Azul
    Verde
    Amarillo
    Violeta
    Observación del color
    Longitud de onda Color observado
    420 nm
    540 nm
    610 nm

    Preguntas de Discusión

    1. ¿Por qué se observaron dos picos de absorbancia con las soluciones violeta y verde?
    2. ¿Existen factores de instrumento que causarán varianza a partir de las curvas que trazó?
    3. ¿Esperaría ver curvas idénticas producidas por diferentes espectrofotómetros?

    hemoglobina spectra.png


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