10.2: Pruebas de Químicos Mutagénicos en Bacterias y Ratones
- Page ID
- 57178
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)
\( \newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\)
\( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\)
\( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\)
\( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
\( \newcommand{\id}{\mathrm{id}}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
\( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\)
\( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\)
\( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\)
\( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\)
\( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\)
\( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\)
\( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\AA}{\unicode[.8,0]{x212B}}\)
\( \newcommand{\vectorA}[1]{\vec{#1}} % arrow\)
\( \newcommand{\vectorAt}[1]{\vec{\text{#1}}} % arrow\)
\( \newcommand{\vectorB}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vectorC}[1]{\textbf{#1}} \)
\( \newcommand{\vectorD}[1]{\overrightarrow{#1}} \)
\( \newcommand{\vectorDt}[1]{\overrightarrow{\text{#1}}} \)
\( \newcommand{\vectE}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash{\mathbf {#1}}}} \)
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)
Prueba Ames
Los ratones Big Blue son transgénicos para un segmento de ADN que contiene el ADN del bacteriófago lambda, un virus que infecta E. coli, y que sirve aquí como vector para 3 elementos genéticos del operón lac de E. coli:
- el gen lacI
- el operador del operón
- el gen de la beta-galactosidasa (lacZ)
El Ensayo
A los ratones transgénicos se les administran dosis repetidas del presunto carcinógeno durante una semana o dos. Si el químico es mutagénico, provocará mutaciones aleatorias en todo el genoma de cada célula de ratón. Si se produce una mutación en el gen lacI (que codifica el represor lac) o en el operador,
el gen (lacZ) para la beta-galactosidasa ya no será reprimido. Para detectar esto,
- El ADN se extrae de los tejidos del ratón tratado.
- El vector se aísla y se utiliza para elaborar bacteriófagos funcionales.
- Las células de E. coli se mezclan con el bacteriófago y se extienden sobre un medio de cultivo sólido.
- Los bacteriófagos infectan y destruyen (“lisan”) las células de E. coli.
- Esto provoca que zonas circulares claras, llamadas placas, aparezcan en un “césped” de bacterias.
- Antes de morir, las células que han sido infectadas por bacteriófagos portadores de un LacI mutado u operador producirán beta-galactosidasa.
- Esto reacciona con un sustrato en el medio de cultivo volviéndolo azul.
- Los bacteriófagos con genes no mutados producen placas incoloras debido a que no se sintetiza ninguna beta-galactosidasa.
- Contar las placas incoloras y azules.
- El número de placas azules dividido por el número total de placas da la frecuencia de mutación.
Esta fotografía muestra una placa mutante (azul) en un césped de E. coli que contiene muchas placas no mutantes (claras).