9.E: Transposición de ADN (Ejercicios)
- Page ID
- 58684
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)
\( \newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\)
\( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\)
\( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\)
\( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
\( \newcommand{\id}{\mathrm{id}}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
\( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\)
\( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\)
\( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\)
\( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\)
\( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\)
\( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\)
\( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\AA}{\unicode[.8,0]{x212B}}\)
\( \newcommand{\vectorA}[1]{\vec{#1}} % arrow\)
\( \newcommand{\vectorAt}[1]{\vec{\text{#1}}} % arrow\)
\( \newcommand{\vectorB}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vectorC}[1]{\textbf{#1}} \)
\( \newcommand{\vectorD}[1]{\overrightarrow{#1}} \)
\( \newcommand{\vectorDt}[1]{\overrightarrow{\text{#1}}} \)
\( \newcommand{\vectE}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash{\mathbf {#1}}}} \)
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)
Pregunta 9.5. Supongamos que está estudiando un gen que está contenido dentro de un fragmento Eco RI de 5 kb para el alelo de tipo silvestre. Al analizar mutaciones en ese gen, se encontró una que convirtió el fragmento de 5 kb en un fragmento Eco RI de 8 kb. Los análisis posteriores mostraron que los 3 kb adicionales de ADN estaban flanqueados por repeticiones directas de 6 pb, que los 30 pb terminales del ADN adicional eran idénticos en cada extremo pero en una orientación invertida. Los plásmidos recombinantes portadores del fragmento EcoRI de 8 kb confirieron resistencia al antibiótico kanamicina en la bacteria hospedadora, mientras que ni el vector de clonación parental ni un plásmido recombinante que portaba el fragmento EcoRI de 5 kb sí lo hicieron. ¿Cuál concluye que es la base de esta mutación? ¿Qué otras actividades enzimáticas podría esperar que estén codificadas en el ADN adicional?
Utilice el siguiente diagrama para responder a las siguientes dos preguntas. La transposasa codificada por un elemento transponible (TE) ha mellado en cada lado del TE en el replicón donante (negro) y ha hecho una ruptura escalonada en el replicón receptor (gris), y los extremos del TE se han unido al sitio diana (T) en el replicón receptor. Las hebras de los replicones han sido designadas superior (t) o inferior (b). Los triángulos abiertos con 1 o 2 en ellos solo se refieren a ubicaciones en la figura; no forman parte de la estructura.
Pregunta 9.6. La acción de la ADN polimerasa más los dNTPs, cebados en las posiciones 1, seguido de la ligasa (con ATP o NAD) conduce a qué producto o resultado? (En este escenario, nada ocurre en las posiciones 2).
Pregunta 9.7. La acción de una endonucleasa en las posiciones etiquetadas 2 seguida de ADN polimerasa y dNTPs para rellenar los huecos (desde las posiciones 1 hasta los siguientes extremos 5' de los fragmentos de ADN), y finalmente la ADN ligasa (con ATP o NAD) conduce a qué producto o resultado?
Pregunta 9.8. Consulte el modelo para un intermedio cruzado en transposición replicativa en la Fig. 9.13. Si el transposón se trasladó a un segundo sitio en la misma molécula de ADN por transposición replicativa (no a una molécula diferente como se muestra en la Figura), ¿cuáles son las consecuencias para el ADN entre los sitios donante y receptor?
Pregunta 9.9. La técnica de etiquetado de transposones utiliza la integración de transposones para mutar un gran número de genes dejando una “etiqueta” en el gen mutado para permitir el posterior aislamiento del gen mediante sondas moleculares (como sondas de hibridación para el transposón). ¿Cuál es un buen candidato para el etiquetado de transposones en células de mamíferos?