Mecanismo de transposición mediada por ADN

Figura 9.13).

1. La transposasa codificada por un elemento transponible hace cuatro mellas inicialmente. Se realizan dos mellas en el sitio diana, una en cada hebra, para generar una ruptura escalonada con extensiones 5' (3' rebajadas). Las otras dos mellas flanquean el transposón; una mella se hace en una hebra de ADN en un extremo del transposón, y la otra mella se realiza en la otra hebra de ADN en el otro extremo. Dado que el transposón tiene repeticiones invertidas en cada extremo, estas dos mellas que flanquean el transposón son escisiones en la misma secuencia. Así, la transposasa tiene una actividad de mellado específica de secuencia. Por ejemplo, la transposasa de tNA se une a una secuencia de aproximadamente 25 pb localizada dentro de los 38 pb de repetición terminal invertida (Figura 9.10). Se mella una sola hebra en cada extremo del transposón, así como el sitio diana (Figura 9.13). Obsérvese que aunque la diana y el transposón se muestran separados en el dibujo bidimensional de la Figura 9.13, se yuxtaponen durante la transposición.
2. En cada extremo del transposón, el extremo 3' de una cadena del transposón se une a la extensión 5' de una cadena en el sitio diana. Esta ligación también es catalizada por la transposasa. El ATP estimula la reacción pero puede ocurrir en ausencia de ATP si el sustrato está superenrollado. La ligación de los extremos del transposón al sitio diana genera un intermedio de transferencia de cadena, en el que los replicones donante y receptor están ahora unidos por el transposón.

Figura 9.14.Estructura tridimensional de la transposasa Tn5 en complejo con ADN del transposón Tn5. A. El dímero de la transposasa Tn5 se muestra unido a un fragmento de ADN dúplex desde el extremo del transposón. Las hélices alfa son cilindros verdes, las láminas beta son de color amarillo-marrón, las flechas planas y los bucles de proteína son alambres azules. El ADN es un dúplex de dos hilos rojos, uno por cada hebra. B. El ADN se muestra sin la proteína y con los nucleótidos marcados. El extremo del ADN en la parte superior de este panel se orienta hacia el sitio activo en el centro de la proteína en el panel A. La estructura fue determinada por Davies DR, Goryshin IY, Reznikoff WS, Rayment I. (2000) “Estructura tridimensional del intermedio de transposición del complejo sináptico Tn5”. Ciencia 289:77-85. Estas imágenes se obtuvieron descargando las coordenadas atómicas de la Base de Datos de Modelado Molecular en NCBI, visualizándolas con CN3D 3.0 y guardando vistas estáticas como capturas de pantalla.

Colaboradores y Atribuciones

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