12.2H: Anticuerpos Fluorescentes

Los anticuerpos fluorescentes son anticuerpos que han sido etiquetados con un compuesto fluorescente para facilitar su detección en el laboratorio.

Objetivos de aprendizaje

• Describir cómo se pueden usar conjugados de anticuerpos fluorescentes en inmunoensayos para la detección de proteínas

Puntos Clave

• El marcaje fluorescente de anticuerpos se utiliza en lugar de radioisótopos y enzimas para mejorar la sensibilidad y especificidad de las pruebas inmunológicas.
• Los anticuerpos fluorescentes se pueden usar para teñir proteínas del suero del paciente o secciones de tejido fijadas en un portaobjetos o células vivas en suspensión.
• Los anticuerpos fluorescentes se pueden detectar con un microscopio fluorescente o un clasificador de celdas de flujo.

Términos Clave

• radioisótopo: Un isótopo radiactivo de un elemento.

El marcaje fluorescente es otro método para demostrar la complejidad de antígenos y anticuerpos. Las moléculas fluorescentes se utilizan como sustitutos de marcadores de radioisótopos o enzimas. La técnica de anticuerpos fluorescentes consiste en marcar anticuerpos con colorantes como isotiocianato de fluoresceína (FITC). Estos compuestos tienen alta afinidad por las proteínas con las que se conjugan.

Las técnicas fluorescentes son muy específicas y sensibles, por lo que las técnicas fluorescentes basadas en anticuerpos requieren un microscopio fluorescente. Una sustancia fluorescente absorbe luz de una longitud de onda y emite luz de una longitud de onda más larga. La fluoresceína fluoresceína presenta un intenso color verde manzana cuando se excita bajo microscopía fluorescente. La manipulación química en el marcaje de anticuerpos con colorantes fluorescentes para permitir la detección por microscopía directa no perjudica la actividad de los anticuerpos.

Figura: Clasificador de células de flujo: Este instrumento se utiliza para analizar células vivas en suspensión después de teñirlas con anticuerpos fluorescentes.

Después del marcaje de un anticuerpo específico con una molécula fluorescente, aún puede reaccionar con su antígeno e identificarse microscópicamente. Los conjugados de anticuerpos fluorescentes se utilizan comúnmente en inmunoensayos. Los métodos básicos que utilizan anticuerpos fluorescentes incluyen el ensayo de inmunofluorescencia directa, de inhibición e indirecta.

En la técnica directa, se utiliza un anticuerpo fluorescente para detectar reacciones antígeno-anticuerpo a nivel microscópico. El ensayo de inhibición inmunofluorescente es una prueba de bloqueo en la que un antígeno se expone primero a un anticuerpo no marcado, luego a un anticuerpo fluorescente, y finalmente se lava y examina. El ensayo de inmunofluorescencia indirecta se basa en la capacidad de los anticuerpos para reaccionar con antígenos, así como actuar como antígenos y reaccionar con anti-anticuerpo (anti-inmunoglobulina). Esta técnica es ampliamente utilizada para la detección de autoanticuerpos y anticuerpos contra antígenos tisulares y celulares. Los métodos descritos se realizan principalmente en portaobjetos de vidrio con secciones de suero o tejido del paciente. También se puede realizar inmunofluorescencia para identificar antígenos específicos en células vivas en suspensión. Este método se conoce como citometría de flujo y requiere un clasificador de celdas de flujo en lugar de un microscopio fluorescente.