12.2I: Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA)
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El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) es un inmunoensayo enzimático en fase sólida utilizado para detectar la presencia de una sustancia en solución.
Objetivos de aprendizaje
- Describir cómo se puede utilizar el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para detectar y cuantificar antígenos, anticuerpos y alérgenos
Puntos Clave
- El ELISA es una técnica cuantitativa que mide la concentración sérica de antígenos, anticuerpos y alérgenos.
- El ELISA estándar utiliza el principio de captura anticuerpo-antígeno-anticuerpo con el segundo anticuerpo acoplado a una enzima. Si se forma el complejo, la enzima convierte una solución transparente en una coloreada que se puede medir con un espectrofotómetro.
- El ELISA se realiza en una placa de microtitulación de muti-pocillos. Además de la solución de prueba, se agregan soluciones estándar con concentración de antígeno conocida. Estas soluciones se utilizarán para inferir la concentración del antígeno que se está probando.
Términos Clave
- espectrofotometría: Mediante el uso de espectrofotometría.
- epítopo: Esa parte de una biomolécula (como una proteína) que es el objetivo de una respuesta inmune.
El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) es un método para cuantificar un antígeno inmovilizado sobre una superficie sólida. ELISA usa un anticuerpo específico con una enzima acoplada covalentemente. La cantidad de anticuerpo que se une al antígeno es proporcional a la cantidad de antígeno presente, la cual se determina midiendo espectrofotométricamente la conversión de una sustancia transparente en un producto coloreado por la enzima acoplada.
Existen varias variaciones de ELISA, observadas en, pero el método más utilizado es el ELISA sándwich. El ensayo sándwich utiliza dos anticuerpos diferentes que son reactivos con diferentes epítopos en el antígeno con una concentración que necesita ser determinada. Una cantidad fija de un anticuerpo se une a una serie de soportes sólidos replicados, como una placa de microtitulación de plástico de múltiples pocillos. Las soluciones de prueba que contienen antígeno a una concentración desconocida se agregan a los pocillos y se dejan unir. El antígeno no unido se elimina mediante lavado, y se permite que se una un segundo anticuerpo que se une a una enzima. Este segundo complejo anticuerpo-enzima constituye el sistema indicador de la prueba. El antígeno sirve como puente, por lo que cuanto más antígeno haya en la solución de prueba, más anticuerpo ligado a enzimas se unirá. La solución de prueba se utiliza en paralelo con una serie de soluciones estándar con concentraciones conocidas de antígeno que sirven como control y referencia. Los resultados obtenidos de las soluciones estándar se utilizan para construir una curva de unión del segundo anticuerpo en función de la concentración de antígeno. La concentración de antígenos se puede inferir a partir de lecturas de absorbancia de soluciones estándar.
