3.3C: Microscopía de Interferencia
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Objetivos de aprendizaje
- Describir los principios y diferentes tipos de microscopía de interferencia
Fuente de Luz Estéreo
La microscopía de interferencia utiliza un prisma para dividir la luz en dos haces ligeramente divergentes que luego pasan a través del espécimen. Por lo tanto, se basa en medir las diferencias en el índice de refracción al recombinar los dos haces. La interferencia ocurre cuando un haz de luz es retardado o avanzado en relación con el otro.
Hay tres tipos de microscopía de interferencia: clásica, contraste diferencial y contraste de fluorescencia. Desde su introducción a fines de la década de 1960, la microscopía de contraste de interferencia diferencial (DIC) ha sido popular en la investigación biomédica porque produce imágenes de alta resolución de estructuras finas al mejorar las interfaces contrastadas. La imagen producida es de una sección óptica delgada y aparece tridimensional, con una sombra a su alrededor. Esto crea un contraste a través del espécimen que es brillante por un lado y más oscuro en el otro.
El microscopio de interferencia
El microscopio es un microscopio de luz de campo brillante con la adición de los siguientes elementos: un polarizador entre la fuente de luz y el condensador, un prisma de división de haz DIC, un prisma de combinación de haz DIC y un analizador. La manipulación del prisma cambia la separación del haz, lo que altera el contraste de la imagen. Cuando los dos haces pasan a través del mismo material a través del espécimen, no producen ninguna interferencia. Cuando las dos vigas pasan a través de diferentes materiales a través de la muestra, como en los bordes, producen alteración cuando se combinan.
La microscopía de contraste de interferencia diferencial de fluorescencia (FLIC) se desarrolló combinando microscopía de fluorescencia con DIC para minimizar los efectos del fotoblanqueamiento sobre fluorocromos unidos al espécimen teñido. El mismo microscopio está equipado para obtener imágenes simuladamente de un espécimen usando DIC e iluminación fluorescente.
Puntos Clave
- La microscopía de interferencia es superior a la microscopía de contraste de fase en su capacidad para eliminar halos y luz extra.
- En la microscopía de contraste de interferencia diferencial (DIC), la diferencia de trayectoria óptica está determinada por el producto de la diferencia de índice de refracción (entre el espécimen y su medio circundante) y el grosor atravesado por un haz de luz entre dos puntos en la trayectoria óptica.
- Las imágenes producidas por DIC tienen una apariencia distintiva de sombra.
Términos Clave
- fotoblanqueo: La destrucción de una fluorescencia fotoquímica por luz de alta intensidad
- fluorocromo: Cualquiera de los diversos tintes fluorescentes utilizados para teñir material biológico antes del examen microscópico