7.14F: Vectores para clonación genómica y secuenciación
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En biología molecular, un vector es una molécula de ADN utilizada como vehículo para transferir material genético extraño a otra célula.
OBJETIVOS DE APRENDIZAJE
Diferenciar entre vectores de expresión y vectores de transcripción
Claves para llevar
Puntos Clave
- El vector en sí es generalmente una secuencia de ADN que consiste en un inserto (transgén) y una secuencia más grande que sirve como la “cadena principal” del vector.
- Los cuatro tipos principales de vectores son plásmidos, vectores virales, cósmidos y cromosomas artificiales.
- Son comunes a todos los vectores diseñados por ingeniería genética un origen de replicación, un sitio de multiclonación y un marcador seleccionable.
Términos Clave
- vector: Un portador de un agente causante de enfermedad.
- plásmidos: Los plásmidos son secuencias de ADN bicatenarias generalmente circulares que son capaces de replicarse automáticamente en una célula hospedadora.
- cromosomas: Un cromosoma es una estructura organizada de ADN y proteína que se encuentra en las células. Es una sola pieza de ADN enrollado que contiene muchos genes, elementos reguladores y otras secuencias de nucleótidos.
En biología molecular, un vector es una molécula de ADN utilizada como vehículo para transferir material genético extraño a otra célula. Los cuatro tipos principales de vectores son plásmidos, vectores virales, cósmidos y cromosomas artificiales. Son comunes a todos los vectores diseñados por ingeniería genética un origen de replicación, un sitio de multiclonación y un marcador seleccionable.
El vector en sí es generalmente una secuencia de ADN que consiste en un inserto (transgén) y una secuencia más grande que sirve como la “cadena principal” del vector. El propósito de un vector que transfiere información genética a otra célula es típicamente aislar, multiplicar o expresar el inserto en la célula diana. Los vectores llamados vectores de expresión (construcciones de expresión) son específicamente para la expresión del transgén en la célula diana, y generalmente tienen una secuencia promotora que impulsa la expresión del transgén. Los vectores más simples llamados vectores de transcripción solo son capaces de transcribirse pero no traducirse: pueden replicarse en una célula diana pero no expresarse, a diferencia de los vectores de expresión. Los vectores de transcripción se utilizan para amplificar su inserción.
La inserción de un vector en la célula diana generalmente se denomina transformación para células bacterianas, y transfección para células eucariotas, aunque la inserción de un vector viral a menudo se denomina transducción.
Los plásmidos son secuencias de ADN bicatenarias generalmente circulares que son capaces de replicarse automáticamente en una célula hospedadora. Los vectores plasmídicos consisten minimalmente en un origen de replicación que permite la replicación semi-independiente del plásmido en el huésped y también el inserto transgénico. “Los plásmidos modernos generalmente tienen muchas más características, en particular incluyendo un “" sitio de clonación múltiple "” que incluye voladizos de nucleótidos para la inserción de un inserto, y múltiples sitios de consenso de enzimas de restricción a cada lado del inserto.”
En el caso de plásmidos utilizados como vectores de transcripción, la incubación de bacterias con plásmidos genera cientos o miles de copias del vector dentro de la bacteria en horas. Los vectores pueden extraerse de las bacterias, y los múltiples sitios de clonación pueden cortarse mediante enzimas de restricción para extirpar el inserto amplificado cien veces o mil veces. Estos vectores de transcripción plasmídicos carecen característicamente de secuencias cruciales que codifican secuencias de poliadenilación y secuencias de terminación de la traducción en ARNm traducidos, haciendo imposible la expresión de proteínas a partir de vectores de transcripción.
Los plásmidos pueden ser conjugativos/transmisibles y no conjugativos. Los vectores conjugativos median la transferencia de ADN a través de la conjugación y por lo tanto se propagan rápidamente entre las células bacterianas de una población, como el plásmido F, así como muchos plásmidos R y algunos col. Los vectores no conjugativos no median en el ADN a través de la conjugación, como muchos plásmidos R y col.
Los vectores virales son generalmente virus modificados genéticamente que portan ADN o ARN viral modificado que se ha vuelto no infeccioso, pero que aún contienen promotores virales y también el transgén. Esto permite la traducción del transgén a través de un promotor viral. Sin embargo, debido a que los vectores virales carecen frecuentemente de secuencias infecciosas, requieren virus cooperadores o líneas de empaquetamiento para la transfección a gran escala. Los vectores virales a menudo se diseñan para la incorporación permanente del inserto en el genoma del huésped y, por lo tanto, dejan distintos marcadores genéticos en el genoma del huésped después de incorporar el transgén. Por ejemplo, los retrovirus dejan un patrón de integración retroviral característico después de la inserción que es detectable e indica que el vector viral se ha incorporado en el genoma del huésped.
LICENCIAS Y ATRIBUCIONES
CC CONTENIDO LICENCIADO, ATRIBUCIÓN ESPECÍFICA
- Clonación molecular. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Clonación molecular. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Sin límites. Proporcionado por: Boundless Learning. Ubicado en: www.boundless.com//microbiolo... microorganismos. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- transformación. Proporcionado por: Wikcionario. Ubicado en: es.wiktionary.org/wiki/transformation. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Electroporación%20Diagrama. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Archivo:el... on_Diagram.png. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Clonación molecular. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Molecl... cloning_vector. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Clonación molecular. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Molecul... a_a_be_clonado. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Clonación molecular. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Molecul... a_a_be_clonado. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Clonación molecular. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Molecl... cloning_vector. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- vector de clonación. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Cloning%20Vector. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- ADN. Proporcionado por: Wikcionario. Ubicado en: es.wiktionary.org/wiki/DNA. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- clonación. Proporcionado por: Wikcionario. Ubicado en: es.wiktionary.org/wiki/clone. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Electroporación%20Diagrama. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Archivo:el... on_Diagram.png. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
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- transcripción. Proporcionado por: Wikcionario. Ubicado en: es.wiktionary.org/wiki/transcription. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- plásmido. Proporcionado por: Wikcionario. Ubicado en: es.wiktionary.org/wiki/plasmid. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
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- Clonación%20Vector. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Cloning_Vector. Licencia: Dominio Público: No Conocido Derechos de Autor
- Bacteriófago lambda. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Bacteriophage_lambda. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Transducción (genética). Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Transduction_ (genética). Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
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- Sin límites. Proporcionado por: Boundless Learning. Ubicado en: www.boundless.com//microbiolo... n/lambda-fago. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Electroporación%20Diagrama. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Electroporation_diagram.png. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- PCR. Proporcionado por: Wikimedia. Ubicado en: Commons.wikimedia.org/wiki/Archivo:PCR.svg. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
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- Clonación%20Vector. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Cloning_Vector. Licencia: Dominio Público: No Conocido Derechos de Autor
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- Sin límites. Proporcionado por: Boundless Learning. Ubicado en: www.boundless.com//microbiolo... ition/plásmidos. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Sin límites. Proporcionado por: Boundless Learning. Ubicado en: www.boundless.com//microbiolo... on/cromosomas. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
- Electroporación%20Diagrama. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Electroporation_diagram.png. Licencia: CC BY-SA: Atribución-CompartirIgual
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- Transducción (genética) es. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Archivo:tr... enetics) en.svg. Licencia: Dominio Público: No Conocido Derechos de Autor
- Plasmídico. Proporcionado por: Wikipedia. Ubicado en: es.wikipedia.org/wiki/Plasmid. Licencia: Dominio Público: No Conocido Derechos de Autor