9.4B: Cultivo de Tejidos de Virus Animales
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Los virus no pueden cultivarse en caldos microbiológicos estándar o en placas de agar, sino que deben cultivarse dentro de células hospedadoras adecuadas.
Objetivos de aprendizaje
- Descubrir el uso y las razones para cultivar virus animales en células hospedadoras
Puntos Clave
- El cultivo de tejidos es un método útil para cultivar muestras clínicas sospechosas de albergar un virus. Este método ayuda con la detección, identificación y caracterización de virus en el laboratorio.
- El cultivo tisular de virus animales implica cultivar células animales en matraces usando diversos medios de caldo y luego infectar estas células con virus.
- La transfección se puede llevar a cabo usando fosfato de calcio, por electroporación, o mezclando un lípido catiónico con el material para producir liposomas, que se fusionan con la membrana celular y depositan su carga en su interior.
- El efecto citopático es un daño no lítico que los virus causan a las células. Estos varían en su manifestación y efecto dañino.
Términos Clave
- cultivo celular: El complejo proceso por el cual las células se cultivan en condiciones controladas, generalmente fuera de su entorno natural.
- Efecto citopático: Se refiere a cambios degenerativos en las células, especialmente en el cultivo de tejidos, y puede estar asociado con la multiplicación de ciertos virus.
El cultivo celular es el complejo proceso por el cual las células se cultivan en condiciones controladas, generalmente fuera de su entorno natural. En la práctica, el término “cultivo celular” ahora se refiere al cultivo de células derivadas de eucariotas multicelulares, especialmente células animales. Sin embargo, también hay cultivos de plantas, hongos y microbios, incluyendo virus, bacterias y protistas. El desarrollo histórico y los métodos de cultivo celular están estrechamente interrelacionados con los del cultivo de tejidos y el cultivo de órganos. El cultivo de células animales se convirtió en una técnica de laboratorio común a mediados de la década de 1900, pero el concepto de mantener líneas celulares vivas separadas de su fuente original de tejido fue descubierto en el siglo XIX.
Los virus son parásitos intracelulares obligados que requieren células vivas para replicarse. Se pueden usar células cultivadas, huevos y animales de laboratorio para el aislamiento de virus. Aunque los huevos embroyonados y los animales de laboratorio son muy útiles para el aislamiento de ciertos virus, los cultivos celulares son el único sistema de aislamiento de virus en la mayoría de los laboratorios. El desarrollo de métodos para cultivar células animales ha sido esencial para el progreso de la virología animal. Para preparar cultivos celulares, primero se disocian los fragmentos de tejido, generalmente con la ayuda de tripsina o colagenasa. La suspensión celular se coloca luego en un recipiente de vidrio o plástico de fondo plano (placa de Petri, un matraz, una botella, tubo de ensayo) junto con un medio líquido adecuado, por ejemplo, Eagle, y un suero animal. Después de un rezago variable, las células se unirán y se extenderán en el fondo del recipiente para luego comenzar a dividirse, dando lugar a un cultivo primario. La unión a un soporte sólido es esencial para el crecimiento de las células normales.
Los cultivos celulares varían mucho en su susceptibilidad a diferentes virus. Es de suma importancia que los cultivos celulares más sensibles se utilicen para un virus sospechoso particular. Los especímenes para cultivo celular deben ser transportados al laboratorio lo antes posible al ser tomados. Los hisopos deben colocarse en un vial que contenga medio de transporte de virus. Los fluidos y tejidos corporales deben colocarse en un recipiente estéril. Al recibirlo, el espécimen se inocula en varios tipos diferentes de cultivo celular dependiendo de la naturaleza del espécimen y la presentación clínica. Los medios de mantenimiento deben cambiarse después de una hora o a la mañana siguiente. Los tubos inoculados deben ser incubados a 35-37 o C en un tambor giratorio. La rotación es óptima para el aislamiento de virus respiratorios y resulta en una aparición más temprana de los efectos citopáticos (EPC) para muchos virus. Si se utilizan tubos estacionarios, es crítico que los tubos de cultivo se coloquen de manera que la monocapa celular se baña en medio nutritivo.