2.7: Determinación de Cloruro (Método Coulométrico)

LECTURAS RELACIONADAS: Page 285, Ver Métodos en CD-ROM para cloruro

OBJETIVO

Al finalizar este ejercicio, discusión apropiada y lectura relacionada, el alumno podrá:

1. Limpie un clorodómetro y prepárelo para su funcionamiento.
2. Ponga en blanco el instrumento de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
3. Verifique y ajuste la calibración del instrumento con el estándar de cloruro (Cl ^-).
4. Preparar muestras de suero para la ^{determinación} de Cl.
5. Determinar la concentración ^de Cl de muestras desconocidas con 90% de precisión.
6. Enumerar las causas comunes de error en las determinaciones coulométricas de Cl ^-.

PRINCIPIO

En la medición coulométrica de iones cloruro, los iones de plata (Ag ⁺) son generados a una velocidad constante por un electrodo y liberados en una solución ácida diluida. Allí se combinan con iones Cl ^- en la muestra de prueba para formar un precipitado insoluble, AgCl. Cuando todo el Cl ^- se elimina de la solución, un exceso de iones Ag ⁺ es detectado por un sensor y se detiene la titulación. Debido a que la tasa de generación de iones ^Ag+ es constante, la cantidad de tiempo requerida para eliminar todos los iones Cl ^- es directamente proporcional a la concentración como se muestra a continuación:

\[\frac{[Unknown]}{time_{Unknown}}=\frac{[Standard]}{time_{Standard}}\]

O

\[[Unknown] = \frac{time_{Unknown} [Standard]}{time_{Standard}}\]

Algunos instrumentos reportan un tiempo de titulación en segundos a partir del cual se puede calcular la concentración de Cl ^-. Otros realizan un cálculo interno y muestran directamente un valor de Cl ^- en mmol/L.

GLOSARIO

Spike: cantidad o volumen conocido de una sustancia que se agrega a una muestra biológica.

MATERIALES

• Clorómetro Buchler-Cotlove y/o Clorómetro Corning
• Vasos de muestra
• Reactivo ácido
• Pulido de plata
• Buffer Acido
• Agua Destilada
• Estándar
• Controles
• Reactivo de Gelatina (indicador)
• Muestras de Suero

PROCEDIMIENTO

MÉTODO BUCHLER

1. Limpie el electrodo con esmalte de plata y enjuague bien con agua destilada. Esto debe repetirse aproximadamente cada 10 especímenes (o siempre que los resultados se vuelvan erráticos) para asegurar resultados reproducibles.
2. Instrumento de corte
   1. Establecer LECTOR DIRECTO en BLANCO
   2. Establecer el rango de valoración a ALTO
   3. Establecer MICROAMPERES D.C. a +10
   4. Establecer LECTURA DIGITAL a 0000
   5. Establecer AJUSTE TITRATO a 2
   6. Con una pipeta o una pipeta Oxford, dispense 4 mL de Ácido Nitrico-Acético en tazas de titulación de cloruro.
   7. Añadir 4 gotas de indicador de gelatina.
   8. Coloque la taza debajo del agitador y gire el control AJUSTAR TITRACIÓN a 1.
   9. Cuando la aguja MICROAMPERES deje de caer, ajuste la aguja de microamperios ajustable a 10 microamperios por encima de este valor.
   10. Gire el control AJUSTE TITRATO a 2.
   11. Ejecute espacios en blanco duplicados para determinar si la lectura es estable. Ejecutar espacios en blanco adicionales, si es necesario, hasta obtener estabilidad.
   12. Ajuste el dial de retardo de tiempo al número que aparece en la lectura digital. Este intervalo se restará automáticamente de los mmol/L finales.
3. Muestras de valoración
   1. Ajuste el LECTOR DIRECTO en TITRAR.
   2. Establezca la LECTURA DIGITAL en 0000.
   3. Con una pipeta o una pipeta Oxford dispense 4 mL de Reactivo Nítrico-Acético en tazas de titulación de cloruro.
   4. Transfiera 0.05 mL de patrón, espécimen o control al reactivo con pipeta.
   5. Agrega 4 gotas de indicador.
   6. Coloque la taza debajo del agitador y gire AJUST TITRATE a 1.
   7. Cuando la aguja MICROAMPERES se mueva a cerca de 0, gire el control AJUSTAR TITRATO a 2.
   8. Multiplique el número que aparece en la lectura digital después de la titulación por 2 para determinar la concentración de cloruro en mmol/litro.
   9. Repita los pasos c a h para cada muestra adicional a analizar.
   10. Cuando todas las muestras hayan sido probadas, deje el electrodo de valoración sumergido en H ₂ O destilado.

MÉTODO DE CORNING

Asegúrese de que todos los electrodos estén limpios y hayan sido enjuagados con agua destilada. Use esmalte de plata si es necesario.

Acondicionamiento

1. Colocar aproximadamente 15 mL (el volumen exacto no es crítico) de tampón ácido en una taza de muestra.
2. Coloca la taza en la plataforma.
3. Apriete los clips de liberación en la cabeza del electrodo y baje suavemente los electrodos en la solución tampón.
4. Presione el interruptor “Condición” hacia abajo. El instrumento debe operar y detenerse a <200. Si el instrumento continúa más allá de una lectura de 300, apague el interruptor de encendido y consulte con su instructor.

Calibración

1. Usando la misma taza de muestra y solución que se acondicionaron, pipetear 100 ul de estándar a la solución tampón ácida.
2. Presione el interruptor de titulación hacia abajo. Cuando la titulación se detiene, el valor mostrado es la concentración de Cl- en mmol/L.
3. Si la lectura observada para el estándar es ±2 mmol/L del valor esperado, proceder con el procedimiento de titulación. Si el instrumento está fuera de calibración, consulte con su instructor y luego proceda de la siguiente manera.
4. Gire el tornillo de calibración apropiado en la parte posterior del instrumento en sentido horario para aumentar el valor o en sentido contrario a las agujas del reloj para disminuir el valor. Un medio turno aumentará/disminuirá el valor aproximadamente 2 mmol/L.
5. Continuar probando y ajustando el estándar hasta lograr una calibración estable.

Titulación

1. Pipetear 100 ul de muestra (paciente, control) en la taza de muestra*.
2. Presiona el control de titulación hacia abajo.
3. Cuando la valoración se detenga, lea y registre su valor en la hoja de datos.
4. Repita los pasos 1, 2 y 3 para cada muestra a analizar.
5. Cuando todas las titulaciones estén completas, coloque los electrodos en una taza de muestra que contenga 15-20 ml de agua destilada.

*La solución de tampón ácido acondicionado se puede usar para múltiples muestras, y debe cambiarse dentro de 3 muestras después de que se encienda el indicador de solución de cambio. Al cambiar la solución de tampón ácido repita los pasos 1 a 4 del procedimiento de acondicionamiento. No es necesario volver a calibrar al cambiar la solución tampón.

EJERCICIO OPCIONAL

1. Agregar 0.05 mL de una solución de KBr 1 M a una de las incógnitas o controles previamente analizados.
2. Mezcla Vortex de la muestra.
3. Analizar la muestra para Cl ^- según las instrucciones anteriores.
4. Registro Cl ^- resultado en la hoja de datos.

FICHA TÉCNICA, EJERCICIO #7

NOMBRE: ___________ FECHA: ___________

RESULTADOS

	Cl ^-, (mmol/L)
	Buchler	Corning
Estándar
Control Normal
Control Anormal
Desconocido 1
Desconocido 2

EJERCICIO OPCIONAL

\[\text{Unspiked}\; [Cl^{-}] = \text{original result for sample} \times (0.95) = \_\_\_\_\_\_\; mEq/L\]

\[\text{Sample spiked with}\; Br^{-} = \_\_\_\_\_\_\_\; mEq/L\]

\[\% \; \text{reactivity of Br} = \frac{\text{Spiked result} - \text{unspiked result}}{50\; mEq / L} \times 100 \%\]

Preguntas de Discusión

1. Si Br ^- reacciona con Ag ⁺ de la misma manera que Cl ^-, ¿qué error se introduciría a una muestra si contenía niveles inusualmente altos de iones Br ^-?
2. ¿Crees que el yoduro (I ^-) interferirá en este ensayo?
3. ¿Por qué es necesario poner en blanco o acondicionar solo la primera titulación?