2.10: Glucosa en Suero- Método Trinder
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LECTURA RELACIONADA: Capítulo 32 Ver Métodos en CD-ROM para Glucosa.
OBJETIVO
Al finalizar este ejercicio, discusión apropiada y
lectura relacionada, el alumno podrá:
- Determinar los valores de glucosa sérica con 90% de precisión mediante un método colorimétrico.
- Identificar y explicar diferencias específicas entre los métodos de glucosa oxidasa y hexoquinasa.
PRINCIPIO
El método Trinder para análisis de glucosa utiliza las reacciones enzimáticas acopladas que se muestran a continuación
\[Glucose + O_{2} \xrightarrow{\text{glucose oxidase}} glucuronic\; acid + H_{2} O_{2}\]
\[H_{2} O_{2} + reduced\; dye \xrightarrow{\text{horseradish peroxidase}} oxidized\; dye + H_{2} O\]
La reacción es lineal a aproximadamente 10,000 mg/L (1000 mg/dL) y alcanza su punto final en 15-20 minutos a 37°C.
GLOSARIO
Punto final - se refiere al estado final a alcanzar. En el caso de los ensayos químicos, este término se refiere al punto en que la reacción se completa esencialmente y no hay producción neta de producto de reacción.
Agua-blanco -cuando se mide la absorbancia de una solución vs agua pura; se usa agua para “poner a cero” el instrumento (100% T).
MATERIALES
- Estándar de glucosa
- Reactivo Glucosa Oxidasa
- Controles
- Tubos de ensayo (13 x 100 mm)
- Incubadora de Pipetas
- Espectrofotómetro
PROCEDIMIENTO
- Etiquete suficientes tubos de ensayo de 13 x 100 mm para cada muestra estándar, control y paciente a analizar.
- Pipetee 2.0 mL de reactivo de glucosa en cada tubo.
- Agregue 10\(\mu\) L de estándar, control o suero a cada tubo apropiado.
- Mezclar bien.
- Incubar cada tubo a 37°C por 20 minutos.
- Usando cubetas apropiadas, medir la absorbancia de cada mezcla de reacción a 525 nm contra un blanco de agua.
- Calcular cada concentración de glucosa usando la absorbancia y concentración del estándar por el método de proporción (ver Ejercicio #1).
- Registre sus resultados en la hoja de datos.
- Registrar la apariencia de las muestras de suero en la ficha técnica.
EJERCICIO OPCIONAL
- Preparar un hemolizado como se describe en Ejercicio #15 Bilirrubina
- Agregar aproximadamente 10\(\mu\) L del hemolizado a 1 mL de una muestra cuya glucosa se midió previamente. Volver a medir la concentración de glucosa.
- Registrar el valor en la hoja de datos.
| FICHA TÉCNICA, EJERCICIO #10 |
NOMBRE: ___________ FECHA: ___________ |
RESULTADOS
| Glucosa, mg/L | A525 | Valor medido | Valor objetivo |
|---|---|---|---|
| Estándar | |||
| Control Normal | |||
| Control Anormal | |||
| N.° de muestra | |||
| N.° de muestra | |||
| N.° de muestra |
EJERCICIO OPCIONAL
Muestra #____:
Glucosa previamente medida ____x 0.99 = ____________mg/L
Concentración de glucosa en la muestra hemolizada = __________mg/L
Preguntas de Discusión
- ¿Cuál es (sería) el efecto de la hemólisis en la medición de la glucosa por este método? ¿Cómo se podría corregir la presencia de hemólisis en una muestra al usar este método?
- ¿Esta reacción es más o menos específica que un método de electrodo de glucosa oxidasa/oxígeno? ¿Por qué?
- La bilirrubina causará interferencia en este método. ¿Por qué esta interferencia no puede ser corregida por el procedimiento discutido en la pregunta 1?
- ¿Cuáles son las principales ventajas y desventajas del método de glucosa oxidasa/peroxidasa para determinar la glucosa?