2.13: Albúmina Suérica (Método Verde de Bromresol)
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LECTURA RELACIONADA: Capítulo 27 Ver Métodos en CD-ROM para Albúmina.
OBJETIVO
Al finalizar este ejercicio, discusión y lectura apropiada, el alumno podrá:
- Realizar determinaciones de albúmina sérica en 4 muestras con 90% de precisión.
- Explicar el principio detrás del método de Bromcresol Green para albúmina.
- Enumere los factores que causarán interferencia con este método.
PRINCIPIO
La albúmina es conocida por su capacidad para unirse a muchos tipos de compuestos orgánicos, incluidos los tintes orgánicos. Cuando la albúmina se une con Bromcresol Green (BCG) provoca un cambio en el máximo de absorbancia de BCG. Este cambio puede medirse espectrofotométricamente y utilizarse para determinar la concentración de albúmina.
GLOSARIO
Reactivo blanco: una solución utilizada para poner a cero un espectrofotómetro (set 100% T); generalmente contiene todo el diluyente y reactivo en la solución de reacción, pero ninguna muestra. Algunos blancos de reactivo también contienen la muestra, pero carecen de un componente reactivo crucial necesario para producir una reacción de rendimiento de color.
MATERIALES
- Calibrador
- Muestras de suero
- Controles
- Reactivo verde bromesol
- Espectrofotómetro
- Pipetas
- Tubos de ensayo 13 x 100 mm
PROCEDIMIENTO
- Etiquete suficientes tubos de ensayo de 13 x 100 mm para todas las muestras, controles, calibradores y un blanco reactivo.
- Usando una pipeta serológica de 5 mL, pipetee 2.5 mL de reactivo BCG en cada tubo.
- Pipetear 10\(\mu\) L de cada muestra, control o calibrador en los tubos apropiados. Agrega 10\(\mu\) L de agua destilada al tubo de reactivo en blanco.
- Mezclar todos los tubos por inversión.
- Lea la absorbancia de cada tubo a 628 nm contra el reactivo en blanco y registre sus resultados en la hoja de datos.
- Calcular la concentración de albúmina de cada muestra en g/L utilizando el método de proporción de absorbancia/concentración (ver Ejercicio #1 Espectrofotometría Básica).
EJERCICIO OPCIONAL: MEDICIÓN CINÉTICA RÁPIDA
- Siga los pasos 1 y 2 del procedimiento.
- Agrega 10\(\mu\) L de muestra o calibrador y mezcla rápidamente.
- A los 10 segundos de la mezcla, medir la absorbancia a 628 nm.
- Lea nuevamente la absorbancia a 1 minuto y registre en la hoja de datos.
- Calcular la\(\mu\) A (lectura de 60 segundos menos la lectura de 10 segundos) para cada espécimen.
- Calcular las concentraciones de albúmina de las incógnitas por métodos de proporciones (ver Ejercicio #1). $$\ text {Concentración de albúmina} =\ frac {\ Delta A_ {stand}\ times [Alb] _ {stand}} {\ Delta A_ {unknown}} $$
| FICHA TÉCNICA, EJERCICIO #13 |
NOMBRE: ___________ FECHA: ___________ |
RESULTADOS
| Absorbancia | Albúmina g/L (valor objetivo) | |
|---|---|---|
| Calibrador | ||
| Control Normal | ||
| Control Anormal | ||
| N.° de muestra | ||
| N.° de muestra |
EJERCICIO OPCIONAL
| Absorbancia a 628 nm | Albúmina, g/L | ||
|---|---|---|---|
| 10 seg. | 60 seg. | \(\Delta\)A | |
| Calibrador | |||
| Control Normal | |||
| Control Anormal | |||
| N.° de muestra | |||
| N.° de muestra | |||
Preguntas de Discusión
- Se lleva una muestra hemolizada al laboratorio para el análisis de albúmina. ¿Se puede utilizar la muestra? Discutir.
- ¿Por qué no es deseable incubar la reacción antes de medir la absorbancia?
- Algunos analizadores pueden medir la absorbancia de la reacción BCG dentro de los 30 segundos posteriores a la adición de la muestra. ¿Esto tiende a aumentar la especificidad de la reacción?