2.17: Triglicéridos
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LECTURA RELACIONADA: Capítulo 33 Ver Métodos en CD-ROM para Triglicéridos.
OBJETIVO
Al finalizar este ejercicio, las discusiones apropiadas y las lecturas relacionadas, el alumno podrá:
- Determinar el valor de triglicéridos del suero con 90% de precisión usando un punto final, reacción enzimática acoplada.
- Explique qué pasos hay que tomar para tratar especímenes con características inusuales.
- Describir la aparición de muestras con triglicéridos marcadamente elevados.
- Enumerar las causas secundarias de triglicéridos elevados.
PRINCIPIOS
Los triglicéridos son completamente hidrolizados a glicerol libre y ácidos grasos libres por la enzima lipasa. El contenido de glicerol libre liberado se determina enzimáticamente como se muestra mediante las siguientes reacciones secuenciadas acopladas.
\[\text{Triglycerides} \xrightarrow{\text{Lipase}} \text{Glycerol} + \text{Free Fatty Acids}\]
\[\text{Glycerol} + \text{ATP} \xrightarrow{\text{Glycerol}} \text{Glycerol-1-Phosphate} + \text{ADP Kinase}\]
\[\text{ADP} + \text{Phosphoenolpyruvate} \xrightarrow{\text{Pyruvate}} \text{ATP} + \text{Pyruvate Kinase}\]
\[\text{Pyruvate} + NADH + H^{+} \xrightarrow{\text{LD}} \text{Lactate} + NAD^{+}\]
La disminución resultante en la absorbancia a 340nm (disminución en NADH) es una medida estequiométrica del glicerol presente y está directamente relacionada con el contenido de triglicéridos de la muestra.
MATERIALES
- Reactivo triglicérido
- Muestras de pacientes
- Estándar
- Suero de control
- Espectrofotómetro UV
- Cubetas
- Pipetas 37 °C incubadora
PROCEDIMIENTO
- Para cada estándar, control y muestra que se va a analizar, pipetee 3.0 mL de reactivo en una cubeta limpia etiquetada.
- Incubar cada una de las cubetas por 3 minutos a 37°C.
- Ajustar un espectrofotómetro a 340 nm y establecer la absorbancia cero (100% T) con agua destilada.
- Agregar 50\(\mu\) L de estándar al reactivo calentado.
- Mezclar suavemente por inversión y leer la absorbancia inmediatamente (dentro de 15 segundos) y grabar.
- Iniciar un cronómetro y continuar la incubación.
- Repita los pasos 4 y 5 para cada suero de control a probar; le resultará útil espaciar cada tiempo a intervalos de 30 segundos o 1 minuto del estándar.
- Después de exactamente 10 minutos de incubación, tome una segunda lectura de absorbancia o cada mezcla y registre sus resultados en la hoja de datos.
- Calcule la\(Delta\) A total para cada muestra estándar, testigo y de suero y determine el valor de triglicéridos usando la siguiente fórmula: $$\ frac {\ Delta A_ {Unknown}} {\ Delta A_ {Standard}}\ times\ text {conc. std} =\ text {conc. mg/L} $$
Nota
Este procedimiento es lineal a 4000 mg/L, las muestras con valores más altos deben diluirse con solución salina normal y volver a ensayarse.
EJERCICIO OPCIONAL
- Su instructor le proporcionará una serie de muestras de plasma que se han colocado en un refrigerador (4-8 °C) durante la noche.
- Observe estas muestras e indique si son turbias (turbias) o transparentes, exhiben una capa crema en la parte superior, o alguna combinación de estas.
- Registre sus observaciones en la hoja de datos.
- Del Capítulo 33, ¿qué tipo, de haberla, de hiperlipidemia puede estar asociada a cada muestra?
| FICHA TÉCNICA, EJERCICIO #17 |
NOMBRE: ___________ FECHA: ___________ |
RESULTADOS
| Inicial | Absorbancia (10 minutos) |
\(\Delta\)A (Total) |
Triglicéridos (mg/L) |
|
|---|---|---|---|---|
| Estándar | \ (\ Delta\) A (Total) "> | (Valor objetivo) | ||
| Control | \ (\ Delta\) A (Total) "> | |||
| Suero # | \ (\ Delta\) A (Total) "> | |||
| Suero # | \ (\ Delta\) A (Total) "> |
EJERCICIO OPCIONAL
Verificar una o más de estas observaciones para cada muestra
| N.° de muestra | Claro | Ligeramente Nublado | Muy Nublado | Capa Cremosa | Tipo de Hiperlipidemia |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | |||||
| 2 | |||||
| 3 | |||||
| 4 | |||||
| 5 | |||||
| 6 |
Preguntas de Discusión
- ¿Cuál es el aspecto esperado de una muestra de suero que contiene triglicéridos elevados?
- ¿Qué tipo (clasificación) de anormalidad lipídica mostrará una marcada elevación de triglicéridos y la presencia de quilomicrones?
- ¿Qué enfermedad o afección puede ser una causa secundaria de triglicéridos elevados?