2.27: Cromatografía en Capa Fina (TLC) de Medicamentos

LECTURA RELACIONADA: Páginas 110-115

OBJETIVO

Al finalizar este ejercicio, discusión apropiada y lecturas relacionadas, el alumno podrá:

1. Entender y realizar TLC unidimensional.
2. Tiñir un cromatógrafo de capa fina.
3. Calcular las movilidades relativas (Rf).

PRINCIPIO

La cromatografía en capa fina (TLC) se utiliza en áreas de especialidad del laboratorio clínico. Las pruebas incluyen 1) tamizaje para sobredosis de medicamentos, 2) detección de aminoacidurias, 3) determinación de proporciones de l/S y 4) detección de galactosuria o fructosuria. En el presente ejercicio, nos interesa detectar el fármaco pseudoefedrina, un estimulante del SNC utilizado como descongestionante nasal.

Los fármacos se pueden separar por TLC de sílice. La movilidad de cada fármaco es una función de su afinidad relativa por cada una de las dos fases (el soporte sólido y el disolvente móvil) que está relacionada con la naturaleza química de cada fármaco. En general, cuanto más polar sea la droga, más móvil será en un solvente polar. La fase móvil se manipula cambiando la polaridad de sus componentes y el pH. Cambiar el pH, a su vez, cambiará la movilidad de cada fármaco ya que los grupos de ácido orgánico se vuelven más ionizados mientras que los grupos amino se vuelven menos ionizados a medida que aumenta el pH.

MATERIALES

• Orina desconocida (con adición de fármaco estándar un solo medicamento)
• Placas de gel de sílice
• Solvente preparado fresco (60 F-254, EM para cada ejercicio Ciencia)
• Tubos capilares aplicadores Solución de desarrollo TLC: etilacetato:metanol:NH ₄ OH, 85:10:5, V/V
• Secador de pelo
• Tanque de desarrollo capaz de contener placas de vidrio de 20 x 20

GLOSARIO

Punto de aplicación - el lugar en la placa de capa delgada (u otra fase estacionaria) donde se aplica la muestra.

Cámara de desarrollo - el recipiente de cromatografía en el que se coloca la placa de capa delgada hasta que el frente de disolvente alcanza un lugar deseado (se “desarrolla”).

V/V - una abreviatura para la relación de volúmenes de solventes o soluciones utilizadas para preparar una solución.

PROCEDIMIENTO

1. Obtenga un desconocido y un estándar de su instructor.
2. Obtener una placa de sílice que ha sido “preacondicionada” calentando a 70°C durante una hora.
3. Preparar cámaras de solvente colocando 100 mL del solvente de cromatografía en el fondo del tanque de desarrollo que ha sido revestido con hojas de papel de filtro.
4. Dibuje una línea con un lápiz a 2 cm del fondo de cada placa cromatográfica; marque las posiciones de aplicación de la muestra como control, estándar o muestra. Dibuja una línea a 15 cm de la línea de aplicación.
5. Aplique una pequeña cantidad (3\(\mu\) L) de patrón, control o muestra al gel de sílice en cada punto de aplicación. No permita que el área húmeda supere los 5 m de diámetro. Secar la muestra con el secador de pelo. Repita los pasos de aplicación y secado. Aplicar un total de 20-30\(\mu\) L de cada muestra (diámetro\(\leq\) 5 mm).
6. Transfiera la placa, extremo de aplicación en la parte inferior, al tanque de desarrollo y permita que el disolvente migre a la línea de 15 cm marcada en la placa (aproximadamente 45 mm.).
7. Retire la placa de la cámara y colóquelo boca arriba sobre una toalla de papel para que se seque al aire. Marque el extremo del frente solvente con un lápiz antes de que la placa se seque. Un flujo suave de aire caliente del secador de pelo dirigido contra la placa aumentará la velocidad de secado.
8. Pulverizar el cromatograma secado solución de ninhidrina. Seque la tira boca arriba sobre una toalla de papel para drenar el exceso de solución. Aplica calor, usando el secador de pelo, para secar.
9. Delinee las manchas con un lápiz y registre el color y la apariencia en la hoja de datos.
10. Registrar la distancia que migró el frente solvente y la pseudoefedrina (en mm) en la hoja de datos.

FICHA TÉCNICA, EJERCICIO 27

NOMBRE: ___________ FECHA: ___________

RESULTADOS

Tiempo de cromatografía: ______________ minutos.

DROGA	Color	Distancia migrada (mm)	R f
1
2
3
4
5
Desconocido

El medicamento desconocido es: ______________________________

CÁLCULOS

Calcular el Rf de fármaco y desconocido usando la fórmula:

\[R_{f} = \frac{\text{distance spot migrated (mm)}}{\text{Distance solvent front migrated (mm)}}\]

Preguntas de Discusión

1. Si el frente de solvente migrara solo a la mitad de la franja en lugar de 2/3 del camino, ¿cambiarían los valores R _f?
2. Si el frente solvente migrara solo a la mitad de la franja en lugar de 2/3 del camino, ¿cómo se vería afectada la resolución de la droga?
3. ¿Cuál es la ventaja de mantener el lugar de aplicación muy pequeño? ¿Qué pasaría con los valores R _f y la resolución si los spots de aplicación fueran mucho mayores?
4. Si detectaste el medicamento psudoefedrina mediante una prueba de detección de medicamentos de TLC, ¿reportarías el resultado como positivo?

Adjunte fotocopia de tu placa TLC aquí.