3.5: Detección cuantitativa de proteínas (SpectroVis Plus)
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La albúmina sérica bovina (BSA) es una proteína que circula en la sangre de las vacas. Se puede usar BSA purificada con solución de Biuret en diluciones seriadas para generar una Curva Estándar. La curva estándar ilustrará la relación entre la concentración (la variable dependiente) y la absorbancia a 540 nm (la variable independiente). Luego podemos usar esta curva para estimar la concentración de muestras desconocidas.
1. En una gráfica, ¿recuerdas qué eje es el dependiente y cuál es la variable independiente?
2. En la siguiente tabla, ¿puede identificar qué muestras son los controles negativos y cuáles son los controles positivos?
3. ¿Cuál es la predicción de la absorbancia o intensidad de color de los diferentes tubos?
Estándares BSA diluidos
- Etiqueta 9 tubos 1-9
- Combine los componentes de la tabla a continuación para generar la concentración adecuada de soluciones
- El instructor comenzará a configurar las unidades para su distribución.
- Conecte SpectroVis Plus a LabQuest2.
- Encendido.
- Seleccione la aplicación LabQuest.
- En la pestaña “Medidor”, toca Modo.
- Cambia el modo a “Eventos con Entrada”.
- Ingresa el Nombre: Concentración.
- Ingresar Unidades: mg/ml.
- Seleccione “OK”.
- Si aparece un mensaje sobre cómo guardar la ejecución, elija Descartar.
- Toca el área roja que muestra Absorbancia para activar los elementos del menú
- Seleccione “Cambiar longitud de onda”.
- Entra 540.
- Toca el área roja que muestra Absorbancia para activar los elementos del menú.
- Seleccione “Calibrar”.
- Seleccione “Warm Up”.
- Seleccione Calibración de acabado.
- Colocar el tubo 1 (0 mg/ml) en una cubeta para medir la absorbancia (A) en el SpectroVis Plus.
- Toca el ícono del archivador para almacenar estos datos.
- Lea secuencialmente cada muestra a la longitud de onda almacenada (A 540nm) y registre los valores en la siguiente tabla.
- Trazar cada dilución de BSA en plot.ly como un diagrama de dispersión (Iniciar sesión usando las credenciales de Facebook/Google/Twitter de forma gratuita).
- Genere la línea de mejor ajuste para estos estándares con la ecuación de la línea.
- Utilice la ecuación de la línea para estimar la concentración de la muestra desconocida.
Ajuste de Curva
Ejecute la simulación a continuación para comprender cómo puedes usar la serie de dilución estándar para estimar las concentraciones de tus muestras.
Haga clic en la imagen de arriba para comenzar la simulación sobre el ajuste de curvas.
LabQuest2 y SpectroVis Tutorial
Tutorial de Scatterplot
Puedes ver este tutorial a 1.25X y hacer una pausa cuando sea necesario.