3.7: Clones de ADN genómico
- Page ID
- 58636
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)
\( \newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\)
\( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\)
\( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\)
\( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
\( \newcommand{\id}{\mathrm{id}}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
\( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\)
\( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\)
\( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\)
\( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\)
\( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\)
\( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\)
\( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\)
\( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\AA}{\unicode[.8,0]{x212B}}\)
\( \newcommand{\vectorA}[1]{\vec{#1}} % arrow\)
\( \newcommand{\vectorAt}[1]{\vec{\text{#1}}} % arrow\)
\( \newcommand{\vectorB}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vectorC}[1]{\textbf{#1}} \)
\( \newcommand{\vectorD}[1]{\overrightarrow{#1}} \)
\( \newcommand{\vectorDt}[1]{\overrightarrow{\text{#1}}} \)
\( \newcommand{\vectE}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash{\mathbf {#1}}}} \)
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \)
\( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)
Los clones de ADN genómico, que contienen fragmentos individuales de ADN cromosómico, son necesarios para muchos propósitos. Algunos ejemplos incluyen:
- para obtener estructuras detalladas de los genes,
- identificar regiones reguladoras, es decir, secuencias de ADN necesarias para la correcta expresión del gen,
- mapear y analizar alteraciones del genoma, por ejemplo, los genes aislados que cuando mutan causan una enfermedad hereditaria,
- para dirigir alteraciones en el genoma, por ejemplo, por recombinación homóloga para reemplazar un alelo de tipo silvestre por uno mutante (para probar la función del gen en ratón) o viceversa (para curar una enfermedad hereditaria, quizás eventualmente en humanos).
Construcción de bibliotecas de fragmentos de ADN genómico en vectores de clonación
El ADN genómico se digiere con enzimas de restricción (Figura\(\PageIndex{1}\)). Cuanto más frecuentemente se corta una enzima (cuanto más corta es la secuencia de reconocimiento), menor es el tamaño promedio de los fragmentos de ADN. Algunas enzimas cortan muy poco frecuentemente, como NotI (secuencia de reconocimiento de 8 pb) y pueden ser utilizadas para generar fragmentos muy grandes. Alternativamente, se puede hacer una digestión parcial (no todos los sitios se escinden) con una enzima particular y aislar los productos que están en el intervalo de tamaño deseado (por ejemplo, 20 kb). Una forma particularmente inteligente de hacerlo es digerir parcialmente con Sau3AI o MboI (ambos cortados en 'GATC) y ligar estos fragmentos en vector cortado con BamHI (cortes en G'GATCC), es decir, tienen la misma secuencia en el saliente (o extremo pegajoso). En este proceso se utilizan vectores que pueden alojar grandes fragmentos de ADN, tales como vectores de fago l, cósmidos, YAC o vectores P1.
Métodos de cribado para clones de ADN genómico
Un método consiste en utilizar la complementación de una mutación en el hospedador para seleccionar o cribar el gen deseado. Esto funciona igual que la situación de los clones de ADNc descritos anteriormente, y requiere que los fragmentos clonados se expresen en la célula hospedadora. Mucho más común es cribar por hibridación con sondas específicas de genes (Figura\(\PageIndex{2}\)). Frecuentemente el clon de ADNc se encuentra primero, y el clon genómico luego se aísla mediante cribado de hibridación (usando el clon de ADNc como sonda) contra una biblioteca de fragmentos de ADN genómico.
