7.11: Cromatografía de exclusión por tamaño

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La Cromatografía de Exclusión por Tamaño (abreviada SEC) o Cromatografía de Permeación en Gel (abreviada GPC), utiliza perlas de plástico porosas como fase estacionaria. Las cuentas no son completamente uniformes, y los poros o canales pueden ser de diferentes tamaños; puede haber algunas realmente pequeñas así como otras más grandes.

Debido a que las perlas son porosas, las moléculas pueden quedar atrapadas en los poros a medida que viajan más allá de las perlas.

Figura\(\PageIndex{1}\): Moléculas de diferentes tamaños que interactúan con una perla porosa.

Las moléculas más pequeñas tienen más probabilidades de quedar atrapadas en estos poros, porque las moléculas pequeñas pueden caber en estos espacios pequeños con mayor facilidad. Por el contrario, las moléculas más grandes no pueden caber en los poros, y es más probable que sigan moviéndose más allá de las perlas. Las moléculas pequeñas pasan la mayor parte de su tiempo en la fase estacionaria, y eluyen muy lentamente de la columna. Las moléculas grandes pasan su tiempo en la fase estacionaria, y eluyen muy rápidamente de la columna.

En el medio, algunas moléculas pueden encajar en algunos poros más grandes pero no en los más pequeños. Pasarán un tiempo intermedio en la fase estacionaria.

Figura\(\PageIndex{2}\): Moléculas de diferentes tamaños fluyen a través de una columna empaquetada con perlas porosas.

En la práctica, la SEC es un método de separación para macromoléculas. Los polímeros a menudo se separan de esta manera, y también lo son las proteínas. Se necesitan diferencias realmente enormes entre las moléculas para obtener una separación significativa con este método, y no es probable que ese sea el caso si los pesos moleculares son generalmente bajos.

Ejercicio\(\PageIndex{1}\)

Predecir el orden en que se eluirían los siguientes compuestos de una columna de exclusión por tamaño.

la proteína dulce brazzeína, MW = 6.491 D; aspartamo, MW = 294 D
rubisco, MW = 158,300 D; tripsina, MW = 24,000 D
insulina, MW = 23,400 D; titina, MW = 3,800,000 D
poliestireno, MW = 10,000 D; poliestireno, MW = 100,000 D

Contestar
Contestar a: brazzeína y luego aspartamo
Respuesta b: rubsico luego tripsina
Respuesta c: titin luego insulina
Respuesta d: el poliestireno MW 100,000 luego el poliestireno MW 10,000