2.4: TLC -ANÁLISIS

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La cromatografía en capa fina (o TLC) es una forma rápida, barata y confiable de evaluar la composición de una muestra y la identidad de un compuesto dado. La placa TLC funciona por principios cromatográficos: una fase móvil (disolvente o mezclas de disolventes) ascenderá por el material de la placa (fase estacionaria). Los compuestos que son menos polares vagarán más lejos en la placa, porque experimentan atracción les1s hacia el material estacionario. Los compuestos que son más polares vagarán más abajo en la placa, porque experimentan más tracción al material estacionario. Este proceso está separando los diferentes compuestos presentes en la muestra cruda

La mayoría de los compuestos que manejamos en los laboratorios de o-chem en PSU deberían dar una sola mancha en la placa TLC. Idealmente, cada compuesto en una mezcla producirá una mancha distinta por lo que una muestra con dos compuestos dará dos manchas diferentes, y así sucesivamente.

Una propiedad importante de cualquier compuesto, es su valor R _f (factor de retención). En términos simples, este valor es una indicación de hasta qué punto una placa TLC ha vagado un compuesto. Un alto valor de R _f indica que el compuesto ha viajado muy arriba de la placa y es menos polar, mientras que un menor valor de _Rf indica que el compuesto no ha viajado muy lejos, y es más polar. Este valor se calcula fácilmente midiendo la distancia que la mancha ha vagado, y dividiéndola por la distancia que ha recorrido el disolvente. El valor R _f depende tanto del compuesto como del disolvente utilizado para el desarrollo. Si analizamos dos compuestos y dan el mismo valor R _f con el mismo sistema disolvente, lo más probable es que los dos compuestos sean idénticos.

El aparato para hacer un experimento TLC es muy sencillo. Necesitamos una cámara de desarrollo donde se mantenga la fase móvil. La cámara debe estar sellada, y aunque hay cámaras TLC especiales que se pueden usar, un vaso de precipitados cubierto por un vidrio de reloj para crear un sello a menudo es suficiente.

Cómo preparar una placa TLC:

Se dibuja una línea horizontal en la parte inferior de la placa (5-8 mm desde el borde inferior) y otra línea horizontal se dibuja en la parte superior de la placa (a 8 mm del borde superior). Se debe usar un lápiz suave y muy suave porque demasiada presión o lápices más duros romperán el recubrimiento muy delgado de la placa, lo que lleva a resultados inaceptables de TLC después del desarrollo (nunca se deben usar bolígrafos de tinta porque la tinta vagará por la placa).
Las garrapatas verticales se dibujan en la línea de fondo, dependiendo de cuántas muestras se analicen. Estos suelen estar etiquetados (A, B, C, por ejemplo)
Se preparan soluciones de todas las muestras que deben analizarse. Estos no deben estar demasiado concentrados, ni demasiado diluidos y una concentración de alrededor del 5% es un buen punto de partida. Las muestras se aplican a las garrapatas con tubos capilares sin dañar el recubrimiento de la placa.
La placa TLC se coloca en la cámara de revelado, y se tiene cuidado para asegurarse de que el borde inferior de la placa sea perpendicular al disolvente. Si no, partes de la placa se desarrollarán en exceso, y obtendremos mala resolución y resultados poco claros.
La cámara se sella con el vidrio del reloj y se permite que el frente de solvente suba hasta la línea más alta. Luego retiramos la placa y dejamos que se seque antes de observar la placa bajo luz UV.

Discutiremos dos formas comunes de usar un análisis TLC. El primero es verificar la identificación de una com- libra. Se puede usar un análisis TLC rápido para identificar si un compuesto desconocido es o no igual que otro compuesto conocido. Normalmente hacemos tres aplicaciones: una de la muestra desconocida, una de un compuesto stock (conocido) y una tercera con una mancha de ambas (llamada cospot). Si encontramos que las dos manchas tienen los mismos valores de R _f, y la tercera mancha sólo muestra una mancha, los dos compuestos son idénticos.

La segunda forma común de usar una placa TLC-, es monitorear una reacción. Podemos usar análisis de TLC para ver si una reacción ha llegado o no a su finalización. Normalmente vemos la desaparición del material o materiales de partida y la aparición de una nueva mancha que corresponde al producto. Por lo general, tenemos que hacer controles como se describió anteriormente, con manchas del material o materiales de partida para aprender sus valores de R _f.

La placa TLC se etiqueta haciendo una línea a través de la línea base y colocando marcas en los puntos donde se colocarán los puntos. Las marcas están etiquetadas A, B, U y A+U o B+U.

Una buena placa TLC consiste en puntos pequeños y claramente definidos. Las placas malas podrían ocurrir por puntos a la deriva, siendo demasiado grandes, teniendo demasiado movimiento de un solvente demasiado polar, o muy poco movimiento si el solvente no es lo suficientemente polar.

Al igual que cualquiera de las técnicas que hemos discutido en este capítulo, los análisis de TLC requieren una buena cantidad de atención para acertar. Los problemas más probables se pueden rastrear hasta la aplicación y preparación de la placa TLC. Echemos un vistazo más de cerca a algunas placas TLC que son de calidad inadecuada y sus causas.