2.24: Flebotomía

LECTURA RELACIONADA: Capítulo 3, Páginas 69-73

OBJETIVO

Al finalizar este ejercicio, discusión apropiada, y lecturas relacionadas, el alumno podrá:
1. Comprender el método adecuado de procesamiento de tubos de flebotomía.
2. Comprender los mecanismos de acción y los usos de diversos anticoagulantes.
3. Relacionar el color de una muestra hemolizada con el grado de hemólisis y la cantidad de hemoglobina libre.

PRINCIPIO

Dependiendo del tipo de prueba a realizar, hay muchas formas de recolectar sangre, orina y otros fluidos corporales. Por lo general, se utiliza un tipo específico de recipiente de recolección para producir un espécimen que es adecuado para un tipo particular de análisis. Por ejemplo, se coloca yodoacetato en tubos de flebotomía para prevenir la glucólisis. Para recolectar sangre no coagulada, se debe agregar un químico como oxalato, EDTA o heparina para prevenir la coagulación. Otros tipos de tubos de flebotomía, como los utilizados para el análisis de metales traza, están diseñados para reducir la posible contaminación de la muestra a partir de metales exógenos.

GLOSARIO

Parte superior roja -un término que indica un tubo de flebotomía que no contiene anticoagulante ni conservante utilizado para recolectar suero. Término se refiere al color del tapón de goma en el tubo. También- “top verde”, “top morado”, etc.

MATERIALES

• Tubos de flebotomía:
  • sin anticoagulante (parte superior roja)
  • dos heparina (parte superior verde)
  • Citrato (parte superior azul)
  • EDTA (top de lavanda)
  • oxalato (parte superior negra)
  • yodoacetato (parte superior gris)
  • Fluoruro (parte superior gris)
• Centrífuga
• Refrigerador/congelador
• Tubos de ensayo de vidrio de 16 x 100 mm

PROCEDIMIENTO

1. Los estudiantes pueden realizar este ejercicio ya sea de manera individual o en grupos pequeños.
2. Se debe extraer un solo juego de tubos de flebotomía de un solo Individuo. Durante este ejercicio se deben emplear procedimientos estándar de flebotomía, según lo descrito por el Instructor. Después de llenar el conjunto de tubos de flebotomía, deben procesarse como se describe a continuación.
3. Después de la recolección, la parte superior roja, un tubo de heparina, EDTA, oxalato y citrato deben centrifugarse durante 15 minutos.
4. El suero o plasma debe retirarse cuidadosamente del sedimento celular con pipetas Pasteur y colocarse en tubos de ensayo de 16 x 100 mm debidamente etiquetados.
5. Cubra y refrigere los tubos si van a ser utilizados dentro de los 4 días. Congelar (-20°C) si es necesario almacenarlos más allá de 4 días. Nota: Nunca congele la sangre entera no separada porque los glóbulos rojos se lisan.
6. La segunda heparina y los tubos cubiertos de color gris, yodoacetato y fluoruro, deben dejarse reposar a temperatura ambiente durante la noche. Al día siguiente, deberán procesarse como se describió anteriormente.
7. Observar la apariencia (incluyendo el color, grado de tubidez, etc.) de cada conjunto de especímenes, y registrar en la Sección de Resultados de la Ficha Técnica. Durante la discusión en clase, compare los resultados para los diferentes conjuntos de muestras.
8. Tener una alícuota de cada plasma y suero medido para glucosa. Registrar los valores de glucosa para cada muestra en la hoja de datos.

EJERCICIO OPCIONAL: HEMÓLISIS

MATERIALES

• Un tubo de sangre heparinizada
• micropipetas (parte superior verde) para toda la clase
• Tubos de ensayo de 16 x 100 mm

PROCEDIMIENTO

1. Colocar 20 mL de agua destilada en cada tubo de una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetados del 1 al 5.
2. Comenzando con el tubo #1, agregar 0.01, 0.025, 0.05, 0.1 o 0.2 mL de sangre completa bien mezclada y heparinizada en el tubo apropiado.
3. Mezclar los tubos de ensayo cubriendo con Parafilm e invirtiendo.
4. Por inspección visual, anotar y registrar el grado de color rojo impartido a cada solución (puntuación 0 a +4 grado de color).
5. Calcular la concentración de hemoglobina en cada solución, asumiendo una concentración promedio de hemoglobina para el espécimen original de 150 g/L.
6. Tener una alícuota de cada muestra guardada para el análisis de potasio y lactato deshidrogenasa (LD). Registrar los resultados en la hoja de datos.

FICHA TÉCNICA, EJERCICIO # 24

NOMBRE: ___________ FECHA: ___________

RESULTADOS PARTE A:

Color del tubo de flebotomía	Tipo de Muestra (plasma o suero)	Color de la muestra	Presencia de Turbidez	Glucosa mg/L
Gris durante la noche
Gris durante la noche

RESULTADOS PARTE B

Solución #	Grado de Color Rojo (0-4+)	Concentración aproximada de hemoglobina (g/L) *	Lactato Deshidrogenasa U/L	K ^+ mmol/L
1
2
3
4
5

*Usa la ecuación en la siguiente página.

Cálculo de las concentraciones aproximadas de hemoglobina (Hb) en los hemolizados:

Utilice la ecuación de dilución básica de la siguiente manera:

\[(conc_{i} \; Hb) (vol \ldotp \; dil \ldotp) = (conc_{f} \; Hb) (final\; dil \ldotp \; vol \ldotp)\]

donde conc _i Hb = concentración de Hb en sangre (150 g/L)

donde conc _f Hb = concentración de Hb en soluciones diluidas (#1 - #5)

vol. dil. = volumen de sangre que se diluye

final dil. vol. = volumen final al que se diluye la sangre (mL)

Esta ecuación se puede reorganizar para que lea:

\[conc_{f} \; Hb = \frac{(conc_{i}\; Hb)(vol \ldotp \; dil \ldotp)}{(final\; dil \ldotp \; vol \ldotp)}\]

PREGUNTAS DE DISCUSIÓN

1. ¿Qué constituyentes de la sangre serían los responsables de los diferentes colores de las muestras de suero o plasma observadas?
2. ¿Qué causaría la presencia de turbidez en una muestra de suero o plasma?
3. Para cada tipo diferente de tubo de flebotomía, enumere varias pruebas que podrían utilizar adecuadamente ese tubo específico.
4. ¿Qué pruebas se ven afectadas por la alteración de las células sanguíneas (es decir, mezclar material intracelular con plasma o suero)?
5. ¿Qué pruebas pueden verse afectadas por el color (es decir, absorbancia) de la hemoglobina?
6. ¿Deben extraerse los tubos de flebotomía en algún orden específico?
7. ¿Puede explicar alguna diferencia entre los niveles de glucosa para las diversas muestras? ¿Para las muestras almacenadas a 4°C y las que tienen un conservante?
8. ¿Cuál parece ser un mejor indicador de hemólisis, color, niveles de LD o niveles de K+?