28: Cromatografía líquida de alto rendimiento
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En cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) inyectamos la muestra, que está en forma de solución, en una fase móvil líquida. La fase móvil transporta la muestra a través de una columna empaquetada o capilar que separa los componentes de la muestra en función de su capacidad de partición entre la fase móvil y la fase estacionaria. Debido a que combina la separación con el análisis, la HPLC proporciona una excelente selectividad. Al ajustar las condiciones suele ser posible diseñar una separación para que los analitos eluyan por sí mismos, incluso cuando la mezcla es compleja. La selectividad adicional es posible mediante el uso de un detector que no responde a todos los analitos.
- 28.1: Alcance de la HPLC
- La cromatografía líquida de alto rendimiento consiste en cuatro amplios tipos de separaciones: el reparto de un soluto entre dos fases líquidas, la adsorción de un soluto sobre un sustrato sólido, la atracción de un soluto iónico a una resina de intercambio iónico y la exclusión de un soluto suficientemente grande de entrar en un sustrato sólido.
- 28.2: Eficiencia de Columna en Cromatografía Líquida
- A diferencia de la cromatografía de gases, un instrumento de HPLC a menudo debe incluir tubos adicionales para conectar entre sí el puerto de inyección de la muestra y la columna, y la columna y el detector. Los solutos que se mueven a través de este tubo, que no incluye fase estacionaria, viajan con una velocidad que es más lenta en las paredes de la tubería y más rápida en el centro de la tubería; el resultado es un ensanchamiento adicional de la banda.
- 28.3: Instrumentos para Cromatografía Líquida
- En cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) inyectamos la muestra, que está en forma de solución, en una fase móvil líquida. La fase móvil transporta la muestra a través de una columna empaquetada o capilar que separa los componentes de la muestra en función de su capacidad de partición entre la fase móvil y la fase estacionaria. En esta sección consideramos cada una de estas.
- 28.4: Cromatografía de Reparto
- En la cromatografía de reparto, el tiempo de retención de un soluto está determinado por la medida en que se mueve de la fase móvil a la fase estacionaria, y de la fase estacionaria de nuevo a la fase móvil. La extensión de esta partición en equilibrio está determinada por la polaridad de los solutos, la fase estacionaria y la fase móvil.
- 28.5: Cromatografía de adsorción
- En la cromatografía de adsorción (o cromatografía líquido-sólido, LSC) el empaquetamiento de la columna también sirve como fase estacionaria. Para la mayoría de las muestras, la cromatografía líquido-sólido no ofrece ninguna ventaja especial sobre la cromatografía líquido-líquido. Una excepción es el análisis de isómeros, donde la LSC sobresale.
- 28.6: Cromatografía de intercambio iónico
- En la cromatografía de intercambio iónico (IEC) la fase estacionaria es una resina polimérica reticulada, generalmente poliestireno reticulado con divinilbenceno, con grupos funcionales iónicos unidos covalentemente. Los contraiones a estas cargas fijas son móviles y son desplazados por iones que compiten más favorablemente por los sitios de intercambio.
- 28.7: Cromatografía de exclusión por tamaño
- En la cromatografía de exclusión por tamaño, que también se conoce por los términos cromatografía de exclusión molecular o de permeación en gel, la separación de solutos depende de su capacidad para entrar en los poros de la fase estacionaria. Los solutos más pequeños pasan proporcionalmente más tiempo dentro de los poros y tardan más en eluirse de la columna.